阻塞性黃疸細(xì)胞免疫功能調(diào)節(jié)的研究.pdf

1、阻塞性黃疸的病人在圍手術(shù)期中，易伴發(fā)全身炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)，并可能發(fā)展為膿毒血癥，多器官功能障礙綜合癥(MODS)。新的資料表明死亡率仍在15-20％，大多研究表明：阻塞性黃疸宿主存在著免疫功能障礙，特別是細(xì)胞免疫功能障礙，如：肝臟枯否細(xì)胞(Kupffercells)吞噬和清除細(xì)菌能力下降；阻塞性黃疸患者皮膚遲發(fā)性過敏反應(yīng)低下，血白細(xì)胞介素2(IL-2)水平下降，T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫功能受抑制。盡管一直以來人們對阻塞性黃疸宿主免疫狀

2、態(tài)進(jìn)行了大量基礎(chǔ)和臨床過研究，但膽汁淤積導(dǎo)致宿主免疫受損的機(jī)制仍不清楚。主要觀點(diǎn)有兩種：(1)膽汁淤積(如膽鹽)直接造成肝細(xì)胞和免疫細(xì)胞如T淋巴細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的缺陷；(2)膽汁淤積時(shí)宿主血液中存在免疫抑制因子，并推測膽酸、膽紅素、α球蛋白及內(nèi)毒素起這種體液因子的作用。但它們通過何種機(jī)制影響阻塞性黃疸宿主的細(xì)胞免疫狀態(tài)仍不清楚。近年來，人們發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞免疫功能中Th1/Th2細(xì)胞平衡起十分重要的作用，輔助性T細(xì)胞(Th)根據(jù)CD4十T細(xì)胞分

3、泌的兩類不同細(xì)胞因子分為Th1和Th2細(xì)胞，Th1細(xì)胞主要分泌IL-2、ILN-r等，主要介導(dǎo)與細(xì)胞免疫有關(guān)的免疫應(yīng)答；Th2細(xì)胞主要分泌IL-10、IL-6、IL-4等，主要參與體液免疫。較多的研究證明，阻塞性黃疸宿主血IL-2水平下降，也有部分實(shí)驗(yàn)表明，膽總管結(jié)扎(BDL)大鼠早期IL-10、IL-6就明顯上升，表明阻塞性黃疸宿主存在Th1/Th2細(xì)胞失衡。IL-2能促進(jìn)活化T淋巴細(xì)胞增殖，促進(jìn)自然殺傷(NK)細(xì)胞活性等，在細(xì)胞免疫

4、中起到了非常重要的作用；IL-10是重要的抗炎細(xì)胞因子，可抑制IL-2的分泌，誘導(dǎo)前體細(xì)胞向Th2細(xì)胞轉(zhuǎn)化，進(jìn)而抑制T細(xì)胞增殖；前列腺素E2(PGE2)是重要的炎癥介質(zhì)，也是一種免疫調(diào)變劑，具有抑制淋巴細(xì)胞生成IL-2的作用，近年基礎(chǔ)研究表明它也可調(diào)控IL-10表達(dá)。課題通過動(dòng)物及臨床兩方面，分三部分進(jìn)行研究： 第一部分 阻塞性黃疸后前列腺素E2與淋巴細(xì)胞IL-10、IL-2活性的相關(guān)性分析 一、目的 探

5、討阻塞性黃疸大鼠血漿PE2和血淋巴細(xì)胞IL-10、IL-2水平的動(dòng)態(tài)變化及相關(guān)關(guān)系，為阻塞性黃疸的臨床治療提供理論依據(jù)。 二、材料和方法 (一)材料和分組 1、選SD大鼠70只分組，雌雄各半，體重180-240克。隨機(jī)分為正常對照組10只，BDL后一周、二周、三周各20只。 2、PE2放免分析藥盒(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)所)，IL-10、IL-2試劑盒(Sigma，USA)。 (二)方法 1、

6、模型制作：實(shí)驗(yàn)組行膽總管雙重結(jié)扎并剪斷，對照組只游離膽總管，不予結(jié)扎。 2、取腹腔靜脈血提取PGE2，用放免法測試。 3、取腹腔靜脈血分離出淋巴細(xì)胞，培養(yǎng)制備IL-10、IL-2，采用ELISA法監(jiān)測其活性單位。 4、大鼠胸腺行HE染色，光鏡下觀察，取胸腺組織制細(xì)胞懸液于光鏡下計(jì)數(shù)。 5、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：實(shí)驗(yàn)結(jié)果以-X±S表示，各均數(shù)間用t檢驗(yàn)。將來自相同個(gè)體的PGE2和IL-10、IL-2值用直線相關(guān)法進(jìn)行

7、相關(guān)分析。 三、結(jié)論 阻塞性黃疸大鼠存在細(xì)胞免疫功能受損的免疫功能失衡，且可能與血漿PGE2的升高有關(guān)，為下一步應(yīng)用環(huán)氧脂酶抑制劑(如消炎痛)減少PGE2產(chǎn)生，改善細(xì)胞免疫狀態(tài)提供了理論基礎(chǔ)。 第二部分 消炎痛對阻塞性黃疸患者外周血淋巴細(xì)胞IL-10、IL-2活性的影響 一、目的 研究阻塞性黃疸患者外周血淋巴細(xì)胞IL-10、IL-2活性和血漿前列腺素E2水平的變化，同時(shí)觀察消炎痛對上述指標(biāo)

8、的影響。 二、臨床資料和方法 (一)臨床資料 阻塞性黃疸患者16例，男性10例，女性6例，平均年齡52.4歲，另取10例健康成人作為正常對照。 (二)方法 1、分別于用藥前和用藥后7天(口服消炎痛25mg，3/日)，抽血進(jìn)行各項(xiàng)檢測，另取10例年齡、性別相近的健康者作為正常對照。PGE2、IL-10、IL-2的制備與檢測同論文一。 2、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：實(shí)驗(yàn)結(jié)果以-X±S表示，各均數(shù)間用t檢驗(yàn)。

9、將來自相同個(gè)體的PGE2和IL-10、IL-2值用直線相關(guān)法進(jìn)行相關(guān)分析。 三、結(jié)論 本研究表明，阻塞性黃疸病人存在著細(xì)胞免疫功能受損的免疫功能障礙，消炎痛能夠明顯改善阻塞性黃疸患者的細(xì)胞免疫功能狀態(tài)，有可能成為臨床上降低阻塞性黃疸患者易感性有價(jià)值的藥物之一。 第三部分 當(dāng)歸對阻塞性黃疸患者淋巴細(xì)胞IL-2活性和IL-2R表達(dá)的影響 一、目的 通過觀察外周血淋巴細(xì)胞IL-2活性及IL-2R

10、表達(dá)的變化，探討圍手術(shù)期當(dāng)歸對阻塞性黃疸患者細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)作用，旨在為臨床治療尋求有效且副作用小的治療方法。 二、臨床資料和方法 (一)臨床資料 阻塞性黃疸患者14例，男性10例，女性4例，平均年齡48歲，另取10例健康成人作為正常對照。 (二)方法 1、治療組：我們用當(dāng)歸注射液(8mg/kg/d，靜滴)圍手術(shù)期對患者治療14天，術(shù)前10天，術(shù)后繼續(xù)用4天。 2、分別于用藥前、術(shù)前和術(shù)后第4

11、天抽血，用ELISA及免疫熒光法檢測IL-2活性及IL-2R的表達(dá)。 3、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：實(shí)驗(yàn)結(jié)果以-X±S表示，各均數(shù)間用t檢驗(yàn)。 三、結(jié)論： 表明當(dāng)歸具有改善阻塞性黃疸患者圍手術(shù)其免疫功能的臨床實(shí)用價(jià)值。 總結(jié) 一、本課題動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：阻塞性黃疸大鼠存在細(xì)胞免疫功能受抑制，且可能與血漿PGE2的升高有關(guān)。阻塞性黃疸時(shí)，膽汁淤積、內(nèi)毒素血癥都可使患者體內(nèi)PGE2產(chǎn)生和釋放增加，影響淋巴細(xì)胞因子的

12、產(chǎn)生，改變Th1/Th2細(xì)胞平衡，使阻塞性黃疸患者的細(xì)胞免疫功能受抑制。為下一步應(yīng)用環(huán)氧脂酶抑制劑(如消炎痛)減少PGE2產(chǎn)生，改善細(xì)胞免疫狀態(tài)提供了理論基礎(chǔ)。 二、本研究表明，阻塞性黃疸病人存在著細(xì)胞免疫功能受損的免疫功能障礙，消炎痛能夠明顯改善阻塞性黃疸患者的細(xì)胞免疫功能狀態(tài)，有可能成為臨床上降低阻塞性黃疸患者易感性有價(jià)值的藥物之一。但前列腺素是一組花生四烯酸代謝產(chǎn)物，種類繁多，作用復(fù)雜。如其中前列環(huán)素(PGI2)對維持阻塞

13、性黃疸時(shí)的腎血流量、腎小球?yàn)V過率，減少肝腎綜合癥的發(fā)生起重要作用。還需對前列腺素及其它炎性介質(zhì)、細(xì)胞因子在阻塞性黃疸時(shí)發(fā)生的病理改變以及它們之間的相互關(guān)系進(jìn)行深入研究。非固醇類抗炎藥抑制PG產(chǎn)生，作用廣泛，則可能產(chǎn)生相應(yīng)的副作用。需要進(jìn)一步研究，尋求有效且副作用小的治療方法。 三、我們臨床研究表明，當(dāng)歸能夠明顯改善阻塞性黃疸患者淋巴細(xì)胞IL-2的活性及IL-2R表達(dá)，具有改善阻塞性黃疸患者圍手術(shù)期細(xì)胞免疫功能的臨床實(shí)用價(jià)值。阻塞