柚皮素抑制大鼠脈絡(luò)膜新生血管的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、脈絡(luò)膜新生血管(choroidal neovasularization，CNV)是造成患者視力喪失的主要原因之一。引起CNV的病因主要為變性、炎癥、外傷、腫瘤、特發(fā)性，常見于年齡相關(guān)性黃斑變性(AMD)、病理性近視、中心性滲出性脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜炎、外傷引起的脈絡(luò)膜破裂、激光及手術(shù)后醫(yī)源性CNV。其中，老年性黃斑變性是西方國家老年人最常見的致盲眼病之一。對CNV的治療目前尚無有效的方法，因此利用動(dòng)物模型深入研究CNV的發(fā)病機(jī)制和提供新的藥物治

2、療方法是目前眼科的研究熱點(diǎn)。
　　 CNV形成的確切機(jī)制尚不十分明了。研究提示：脈絡(luò)膜血流受損是重要原因之一，脈絡(luò)膜灌注減少導(dǎo)致玻璃膜疣形成、RPE萎縮和Bruch膜脂質(zhì)浸潤，最終導(dǎo)致RPE脫離和CNV形成。隨著現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，人們逐步認(rèn)識(shí)到了炎癥在CNV形成過程的重要作用。各種炎癥因子促進(jìn)玻璃膜疣形成，視網(wǎng)膜色素上皮光感受器變性和Bruch膜的破裂。誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)在炎性細(xì)胞因子和局部微循環(huán)缺氧狀態(tài)下被

3、誘導(dǎo)表達(dá)，繼而引起NO合成增加，促進(jìn)VEGF引起的血管通透性增加，參與VEGF介導(dǎo)的CNV形成。環(huán)氧合酶(Cox-2)在炎癥反應(yīng)中催化花生四烯酸生成前列腺素。其中前列腺素E2誘導(dǎo)生成毛細(xì)血管，前列腺環(huán)素上調(diào)VEGF表達(dá)，導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞滲透性增高，促進(jìn)CNV發(fā)生。本實(shí)驗(yàn)以上述理論為依據(jù)，通過一種既能改善脈絡(luò)膜血流灌注，又具有抗炎作用的中藥來研究其對CNV的防治效果及作用機(jī)制。
　　 研究發(fā)現(xiàn)許多天然黃酮類藥物能改善脈絡(luò)膜血流，其

4、中柚皮素作用尤其顯著，柚皮素還具有較強(qiáng)的抗炎作用。所以本實(shí)驗(yàn)選擇柚皮素作為治療藥物來觀察其對脈絡(luò)膜新生血管的抑制作用。
　　 本實(shí)驗(yàn)采用國內(nèi)外最常用的激光誘發(fā)CNV動(dòng)物模型，對雄性棕色挪威(BN)大鼠進(jìn)行視網(wǎng)膜氪黃激光光凝。40只CNV模型BN大鼠隨機(jī)分為空白對照組和柚皮素治療組兩組，每組各20只BN大鼠，40只眼。治療組在視網(wǎng)膜光凝后第2天開始每日一次腹腔注射2％柚皮素20mg/kg，空白對照組正常飼料、水喂養(yǎng)，時(shí)間均為4周。

5、光凝后2周、4周分別作視網(wǎng)膜熒光血管造影(FFA)檢查以觀察視網(wǎng)膜光凝斑的熒光素滲漏情況，評估CNV的形成。光凝后4周取材作組織病理學(xué)觀察，VEGF、Cox-2、iNOS免疫組化檢測，通過組織形態(tài)學(xué)和組織化學(xué)方法來觀察柚皮素對CNV的抑制效果，探討其作用機(jī)制。
　　 研究結(jié)果顯示：光凝后2周FFA檢查，空白對照組CNV成模率為95％，柚皮素治療組CNV成模率為75.83％，P=0.00<0.01，有極顯著差異性，表明柚皮素能有效

6、抑制CNV的形成。光凝后4周組織病理學(xué)觀察，治療組新生血管形成，纖維細(xì)胞及RPE細(xì)胞增殖均明顯少于對照組，視桿、視錐細(xì)胞層，內(nèi)、外核層，內(nèi)，外網(wǎng)層，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層，神經(jīng)纖維層的破壞、水腫、增生程度也小于對照組。免疫組化檢測治療組的光凝損傷區(qū)VEGF、COX-2、iNOS陽性細(xì)胞表達(dá)范圍、細(xì)胞漿棕色染色深淺度均弱于對照組，非參數(shù)秩和檢驗(yàn)治療組與對照組VEGF、Cox-2、iN0s在視網(wǎng)膜的表達(dá)有顯著差異性，P分別為0.007、0.004、0

7、.003，均<0.01。并且治療組和對照組VEGF、Cox-2、iNOS在視網(wǎng)膜和脈絡(luò)膜內(nèi)的表達(dá)部位相同，表明VEGF、Cox-2和iNOS與CNV的形成有關(guān)，柚皮素能有效地抑制VEGF、Cox-2和iNOS在CNV中的表達(dá)。
　　 研究結(jié)果表明：柚皮素對正常視網(wǎng)膜及脈絡(luò)膜血管無毒副作用，除光凝部位外其他視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜組織未見炎癥細(xì)胞浸潤。柚皮素能有效地抑制激光誘導(dǎo)的BN大鼠實(shí)驗(yàn)性CNV的形成和發(fā)展。柚皮素有效地抑制了VEGF、C

8、ox-2、iNOS在CNV中的表達(dá)，其機(jī)制可能是通過抑制光凝損傷后炎細(xì)胞(中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、白細(xì)胞等)趨化、浸潤、活化，從而抑制多種炎癥因子、血管生長因子的釋放，抑制有活性的巨噬細(xì)胞和其他炎癥細(xì)胞分泌能損害細(xì)胞和分解Bruch膜的酶，如膠原酶、胰肽酶E。抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的分化、增殖、遷移，從而抑制內(nèi)皮細(xì)胞成窗、移動(dòng)，減少新生血管形成。柚皮素可能通過降低對微血管，特別是毛細(xì)血管后靜脈和小靜脈的高滲作用，降低血管滲透性，減少血液中大分子