小鼠體外受精胚與體內(nèi)胚Oct4基因啟動子區(qū)DNA甲基化差異的研究.pdf

1、DNA甲基化是表觀遺傳修飾的主要形式之一，對哺乳動物的正常發(fā)育至關(guān)重要。體細胞中DNA甲基化模式是穩(wěn)定的，但在早期胚胎中：DNA會發(fā)生去甲基化和再甲基化。Oct4是一種與胚胎發(fā)育相關(guān)的多能調(diào)控因子，它在建立和維持細胞多能性方面起著重要作用。本試驗以Oct4基因作為候選基因，運用亞硫酸氫鹽測序法，對小鼠體細胞、生殖細胞以及早期胚胎發(fā)育過程中各個時期Dct4啟動子區(qū)甲基化進行檢測，并對其在體內(nèi)和體外受精 (in vitro felliliz

2、ation，IVF)胚中的甲基化進行比較。 試驗的各種檢測材料經(jīng)低熔點瓊脂糖包埋、亞硫酸氫鹽變性處理后進行巢式PCR擴增，然后將PCR產(chǎn)物進行純化、連接、轉(zhuǎn)化于感受態(tài)大腸桿菌中。對轉(zhuǎn)化后的菌體進行菌體PCR鑒定，將有特異性條帶的菌液送檢測序。對測序結(jié)果進行分析的結(jié)果表明：(1)體細胞基因組中Oct4啟動子區(qū)呈高度甲基化狀態(tài)(73.8±5.9％，平均數(shù)±標準差)，極顯著高于精子和卵子(P<0.01)；精子和卵子之間甲基化水平也存在

3、顯著差異(P<0.05)，精子中略微甲基化(18.75±4.1％)，而卵子中基本上是非甲基化的(2.5±1.4％)。(2)小鼠體內(nèi)各時期胚胎Oct4啟動子區(qū)均呈低甲基化狀態(tài)，2-細胞、4-細胞、8-/16-細胞和桑椹胚時期甲基化水平分別為5.63±2.5％、4.38±2.0％、3.75±1.4％、1.88±0.2％，甲基化逐漸丟失，但無顯著性差異(P>0.05)；而在囊胚期，Oct4啟動子區(qū)甲基化水平顯著升高(6.88±2.4％，P<0

4、.05)，重新甲基化開始。(3)小鼠體外受精胚與體內(nèi)胚甲基化模式相似，其各時期胚胎Oct4啟動子區(qū)也呈低甲基化狀態(tài)，從2-細胞至桑椹胚，隨著胚胎發(fā)育而呈下降趨勢，相互之間差異不顯著(P>0.05)，分別為11.25±4.5％(2-細胞)、6.25±2.1％(4-細胞)、5.63±3.7％(8-16-細胞)、1.88±0.2％(桑椹胚)；而在囊胚期，甲基化水平顯著升高(7.5±2.4％，P<0.05)。(4)對比體外與體內(nèi)各時期胚胎Oct