黃連素調(diào)節(jié)醛糖還原酶-p38MAPK信號通路抗糖尿病腎病的研究.pdf

1、糖尿病腎病(Diabetic nephropathy，DN)是糖尿病(Diabetes mellitus，DM)慢性微血管并發(fā)癥之一，是導(dǎo)致終末期腎衰竭的主要原因，嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量和危害患者的生命健康。DN的發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜，尚未完全清楚，目前認(rèn)為是多種復(fù)雜的因素，如糖代謝異常、腎臟血流動力學(xué)、蛋白質(zhì)非酶糖基化、氧化應(yīng)激、多元醇通路激活、遺傳易感基因等綜合作用的結(jié)果。近年來，醛糖還原酶在糖尿病慢性并發(fā)癥包括DN的發(fā)生所起的作用日

2、益受到關(guān)注。醛糖還原酶(AR)是多元醇通路中重要的限速酶，持續(xù)高血糖刺激下，醛糖還原酶被激活，通過活化多元醇通路，啟動了一系列過程如高滲應(yīng)激，葡萄糖及脂質(zhì)的氧化應(yīng)激，蛋白的非酶糖基化等單獨或協(xié)同作用損傷腎臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞、。腎小球和腎小管細(xì)胞，引起細(xì)胞外基質(zhì)增加，系膜擴(kuò)張，腎臟肥大，從而導(dǎo)致糖尿病腎病的發(fā)生。p38MAPK是高糖致糖尿病腎病發(fā)病的重要的信號傳遞分子，p38MAPK信號通路是細(xì)胞信號傳遞的交匯點或共同通路。目前研究認(rèn)為，細(xì)

3、胞內(nèi)高糖刺激下，多元醇通路激活后可以通過二酯酰甘油(DAG)-PKC通路、氧化應(yīng)激、蛋白質(zhì)非酶糖基化等環(huán)節(jié)最終導(dǎo)致p38MAPK通路的激活，進(jìn)而磷酸化轉(zhuǎn)錄因子，調(diào)節(jié)與細(xì)胞生長、增殖、分化和細(xì)胞外基質(zhì)蛋白相關(guān)基因的表達(dá)，促進(jìn)或加重糖尿病慢性并發(fā)癥的病變過程。 黃連素(berberine，[C<,20>H<,18>NO<,4>]<'+>，又稱小檗堿)是從小檗屬植物黃連(Coptidis Rhizoma，CR)、黃柏(Cortex P

4、hellodendri)根莖中提取出的一種異喹啉類生物堿。既往大量研究證實：黃連素具有降血糖、降血脂、降血壓，抑制醛糖還原酶、抗氧化等藥理活性，這些研究顯示了黃連素作為防治糖尿病并發(fā)癥用藥具有一定的臨床價值和應(yīng)用前景。近年來有研究發(fā)現(xiàn)：黃連素可以明顯改善2型糖尿病大鼠的腎臟損害，保護(hù)。腎功能，延緩糖尿病腎臟病變的發(fā)生和發(fā)展。目前，尚未見到從影響醛糖還原酶/p38 MARK信號通路研究黃連素抗糖尿病腎病的作用機(jī)制的研究報道。因此，在前人研

5、究基礎(chǔ)上，本課題通過體內(nèi)、體外實驗觀察黃連素對糖尿病腎損傷大鼠腎功能的保護(hù)作用，對高糖培養(yǎng)的大鼠腎小球系膜細(xì)胞細(xì)胞增殖與膠原合成的影響，從醛糖還原酶/p38 MARK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路方面探討黃連素抗糖尿病腎病可能的作用機(jī)制。 第一章黃連素對糖尿病腎損傷大鼠腎功能保護(hù)作用及醛糖還原酶的影響(體內(nèi)實驗)研究目的1、觀察黃連素對鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)的糖尿病腎損傷大鼠腎功能的保護(hù)作用2、觀察黃連素對鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)的糖尿病腎損傷

6、大鼠氧化應(yīng)激、腎臟醛糖還原酶活性及其mRNA和蛋白表達(dá)的影響研究方法1、模型復(fù)制、分組、給藥：35只Wistar大鼠，體重為250+20g，禁食6小時后，單次腹腔注射50mg/kg鏈脲佐菌素(STZ，以枸椽酸鈉溶液稀釋，PH4.0，冰盒中新鮮配制)復(fù)制糖尿病大鼠模型。注射72h后測血糖，以禁食6h血糖≥16.7mmol/L，者，為糖尿病模型大鼠。選取糖尿病模型大鼠20只，隨機(jī)分為模型組、黃連素組，每組各10只。選同批次10只正常大鼠做為

7、正常對照組。糖尿病模型復(fù)制成功后次日，黃連素組大鼠給予0.5％醋酸纖維素鈉溶液制成的黃連素混懸液，灌胃，劑量為0.2g/kg。模型組和正常對照組給予等體積的0.5％醋酸纖維素鈉溶液。每日給藥時間8-9am，每周給藥6天，共觀察12周。實驗期間大鼠自由進(jìn)食、飲水，不使用胰島素等降糖藥物。 的臨床價值和應(yīng)用前景。近年來有研究發(fā)現(xiàn)：黃連素可以明顯改善2型糖尿病大鼠的腎臟損害，保護(hù)腎功能，延緩糖尿病腎臟病變的發(fā)生和發(fā)展。目前，尚未見到從