雪芪通腎湯對糖尿病腎病大鼠TGF-β1-p38MAPK信號轉導通路的影響.pdf

1、目的：糖尿病腎病是糖尿病代謝異常引發(fā)的腎小球硬化癥，是導致慢性腎衰竭(CRF)的主要原因之一，國內外腎臟病學者在不斷探索糖尿病腎病的發(fā)病途徑及治療方法，而中醫(yī)藥以其獨特的優(yōu)勢，在糖尿病腎病的防治中，占有重要地位。本研究通過首先建立糖尿病(DM)動物模型，進而發(fā)展為糖尿病腎病(DN)，應用雪芪通腎湯對該模型進行干預性治療，通過觀察實驗動物的24小時尿蛋白定量、糖化血紅蛋白、血脂、腎功能、腎臟病理形態(tài)學變化以及腎組織中TGF-β1/p38M

2、APK信號轉導通路的變化，觀察雪芪通腎湯對糖尿病腎病的治療作用及探討其可能機制，為其臨床推廣應用提供實驗基礎和理論依據(jù)。 方法：選用清潔級健康雄性SD大鼠46只，體重200±10g，普通飼料適應性喂養(yǎng)一周，代謝籠取尿檢測尿糖和尿蛋白均為陰性，按體重隨機分為正常組(Normal)10只，模型組(Model)、貝那普利組(Beilazepril)、雪芪通腎組(XQTS)各12只。除正常組外，其余各組大鼠一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(ST

3、Z)60 mg/kg，正常組注射相應量生理鹽水，72小時后測血糖，以≥16.7mmol/L為DM模型成模標準。造模各組在DM模型成模后，按血糖水平重新分組，組別與動物數(shù)不變。治療各組在成模后一周開始按成人劑量的20倍給藥，每日一次。雪芪通腎組按26g/kg予雪芪通腎湯，貝那普利組按10mg/kg灌胃，各組共給藥23周；正常組和模型組均灌服相應量的生理鹽水。于DM成模后第24周末禁食不禁水留取各組大鼠24小時尿液測定24小時尿蛋白定量；而

4、后麻醉動物，取血檢測各組大鼠糖化血紅蛋白(HbA1c)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)；摘取腎臟稱重計算肥大指數(shù)，光鏡下觀察病理形態(tài)學變化，免疫組織化學法檢測腎組織TGF-β1表達情況，RT-PCR檢測腎組織TGF-β1、p38MAPKmRNA的表達，所有數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標準差(Mean±S)表示，采用單因素方差分析對實驗結果進行統(tǒng)計學分析，數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析應用SPSS統(tǒng)計軟件完成。 結果：

5、 1.實驗大鼠的一般狀況正常組大鼠飲食正常，眼睛有神，反應敏捷，被毛緊披，肌肉豐滿，糞便呈麥粒狀，尿量正常。其余3組注射STZ后，均出現(xiàn)明顯的多飲、多食、多尿癥狀，并慢慢出現(xiàn)精神萎靡，反應遲鈍，少動抱團。實驗最后一周，與正常組相比，造模各組大鼠明顯體型瘦小，骨骼突出，肌肉偏少，上述癥狀以模型組最為顯著。治療期間造模各組均有大鼠死亡情況，其中模型組死亡3只，貝那普利組死亡1只，雪芪通腎組死亡1只，死亡原因估計為高血糖引起代謝紊亂最終導

6、致臟器衰竭。 2.各組大鼠體重、右腎重、肥大指數(shù)(腎重/體重)的比較模型組、貝那普利組、雪芪通腎組大鼠體重比正常組明顯偏輕，而三個造模組各組之間大鼠體重無顯著性差異；正常組與造模各組大鼠右腎重無顯著性差異；模型組、貝那普利組、雪芪通腎組大鼠肥大指數(shù)與正常組相比明顯偏高，而模型組與兩個治療組之間無顯著性差異。 3.各組大鼠24小時尿蛋白定量的比較24小時尿蛋白定量，模型組、貝那普利組、雪芪通腎組與正常組比較均有顯著升高，貝

7、那普利組、雪芪通腎組與模型組比較明顯降低，而貝那普利組、雪芪通腎組之間無顯著區(qū)別。 4.各組大鼠糖化血紅蛋白(HbA1c)的比較模型組、貝那普利組、雪芪通腎組各組大鼠糖化血紅蛋白比正常組明顯升高，而模型組、貝那普利組、雪芪通。腎組之間無顯著性差異。 5.各組大鼠血脂的比較造模各組血清總膽固醇(TC)明顯高于正常組，雪芪通腎組則比模型組明顯偏低，而貝那普利組、模型組之間的比較無顯著性差異，對于甘油三酯(TG)，兩個治療組與

8、正常組均低于模犁組，而兩個治療組與正常組比較無顯著性差異。 6.各組大鼠腎功能的比較兩個治療組與正常紕的血肌酐(Scr)明顯低于模型組，與正常組相比，貝那普利組明顯升高，而雪芪通腎組與正常組之間無顯著性差異；對于尿素氮(BUN)，兩治療組與正常組也均明顯低于模型組，而與正常組比較，貝那普利組和雪芪通腎組的BUN則有所升高，而兩者之間的升高水平無顯著性差異。 7.腎臟病理形態(tài)學觀察HE、PAS及Masson染色顯示：正常組

9、腎小球結構完整，未見腎小球肥大，腎小球毛細血管基底膜、系膜、基質未見明顯異常改變；模型組可見腎小球肥大，腎小球毛細血管基底膜增厚，腎小球系膜細胞增生、系膜基質增多，系膜區(qū)增寬，腎間質有明顯纖維化：貝那普利組與雪芪通腎組也均有不同程度病理改變，但與模型組相比病變較輕。 8.免疫組化檢測結果TGF-β1主要表達于腎小球內，遠端小管也有表達，但表達較弱。正常組中TGF-β1有弱表達，模型組和兩個治療組中表達增強。半定量分析結果顯示，與

10、正常組相比，模型組的表達要明顯加強，而兩個治療組的表達也強于正常組，與模型組比較，貝那普利組和雪芪通腎組的表達要明顯降低，貝那普利組和雪芪通腎組之間的比較則無明顯差異。 9.RT-PCR檢測結果TGF-β1mRNA半定量分析結果顯示，與正常組相比，模型組的表達要明顯加強，而兩個治療組的表達也強于正常組，與模型組比較，貝那普利組和雪芪通腎組的表達要明顯降低，貝那普利組和雪芪通腎組之間的比較則無明顯差異。p38MAPKmRNA半定量

11、分析結果顯示，與正常組相比，模型組的表達要明顯加強，而兩個治療組的表達也強于正常組，與模型組比較，貝那普利組和雪芪通腎組的表達要明顯降低，貝那普利組和雪芪通腎組之間的比較則無明顯差異。 結論： 1.雪芪通腎湯可以減少DN大鼠的尿蛋白；降低TC、TG，改善脂質代謝；降低Scr及BUN，保護腎功能。 2.雪芪通腎湯可以有效的抑制DN大鼠的腎小球毛細血管基底膜的增厚、系膜基質的增生，延緩腎臟病理的進展。 3.雪