c-Jun氨基末端激酶信號(hào)傳導(dǎo)通路調(diào)控乙醛刺激的肝星狀細(xì)胞增殖、凋亡的研究.pdf

1、背景和目的:肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cell,HSC)是肝纖維化發(fā)生過(guò)程中細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)形成的主要細(xì)胞,HSC的活化、增殖及凋亡受細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)通路的調(diào)控,近年來(lái),肝纖維化的發(fā)病機(jī)制與HSC信號(hào)傳導(dǎo)一直是研究的熱點(diǎn).對(duì)酒精性肝病的研究已證明:乙醇的代謝產(chǎn)物-乙醛作為有效刺激信號(hào)是激活HSC導(dǎo)致肝纖維化發(fā)生的關(guān)鍵分子.c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-termin

2、al kinase,JNK)信號(hào)通路參與調(diào)控細(xì)胞的增殖、分化與凋亡,是絲裂原激活蛋白激酶(Mitogen activated protein kinase,MAPK)家族的重要成員之一.目前就JNK信號(hào)傳導(dǎo)通路的激活與肝纖維化發(fā)生機(jī)制的研究報(bào)道較少,有研究顯示JNK信號(hào)通路的活化與肝細(xì)胞的增殖、HSC內(nèi)Ⅰ膠原及其相關(guān)基因的表達(dá)密切相關(guān).我們前期研究證實(shí)MAPK家族中的細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal-regu

3、lated kinase,ERK)通路是調(diào)控乙醛刺激HSC增殖的重要通道,但國(guó)內(nèi)外尚未有關(guān)JNK與HSC的增殖及凋亡的研究報(bào)道.該實(shí)驗(yàn)旨在通過(guò)JNK特異性阻斷劑SP600125作用于乙醛刺激的HSC后,觀察HSC內(nèi)JNK活性變化與細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡的關(guān)系;初步探討JNK信號(hào)傳導(dǎo)通路調(diào)控HSC細(xì)胞增殖及凋亡的分子機(jī)制;以期為肝纖維化的發(fā)生和防治提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù).方法:體外培養(yǎng)大鼠HSC株;采用Western blot、免疫組化法檢測(cè)乙醛

4、刺激后HSC內(nèi)JNK活性的變化,和用不同劑量SP600125(20、60、100ng/ml)對(duì)乙醛刺激HSC內(nèi)JNK活性的影響;采用MTT比色法、流式細(xì)胞儀分別檢測(cè)上述劑量的SP600125作用于乙醛刺激的HSC后細(xì)胞增殖及其細(xì)胞周期變化;DNA片段凝膠電泳及流式細(xì)胞儀分析SP600125對(duì)乙醛刺激后HSC的細(xì)胞凋亡的影響.結(jié)論:(1)乙醛刺激HSC后,引起JNK信號(hào)傳導(dǎo)通路活化.(2)乙醛促進(jìn)HSC增殖與JNK活化呈正相關(guān),并呈劑量依