急性腦梗死與6個miniSTR基因座多態(tài)性的相關(guān)研究.pdf

1、目的：短串聯(lián)重復(fù)序列(short tandem repeat，STR)是重復(fù)單位長度為2～6個堿基對，重復(fù)次數(shù)在數(shù)次至幾十次之間的串聯(lián)重復(fù)DNA序列，是第二代人類遺傳標(biāo)記。MiniSTR是一種新的STR分型技術(shù)，它重新設(shè)計引物，使引物更接近核心重復(fù)序列，擴(kuò)增的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction，PCR)產(chǎn)物比STR分型短一些，其長度在50～150bp。由于miniSTR的擴(kuò)增產(chǎn)物更小，對于降解的微量檢材可

2、以更有效的獲得正確分型。目前許多證據(jù)表明遺傳因素和免疫因素在腦梗死的發(fā)病中有顯著作用，普遍認(rèn)為腦梗死是由多個基因和環(huán)境因素共同作用導(dǎo)致的一類極其復(fù)雜的疾病。越來越多的學(xué)者開始關(guān)注遺傳因素在缺血性卒中發(fā)病進(jìn)程中所起到的作用，也逐漸意識到不同個體的易感性差異在腦血管病發(fā)生機(jī)制中具有重要意義，腦梗死的分子遺傳學(xué)研究引起了人們的重視。國外有研究報道腦梗死的確與某些STR基因座的多態(tài)性有關(guān)。本研究選擇了D10S1248、D14S1434、D22S

3、1045、D1S1677、D2S441、D4S2364共6個具有較高多態(tài)性的miniSTR基因座，首次將該6個基因座應(yīng)用于急性腦梗死易感基因的研究，對腦梗死的易感基因和保護(hù)基因進(jìn)行探索，為研究腦梗死的發(fā)病機(jī)制提供一定的線索。 方法：選取大連市中心醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院患者，全部病例診斷按照全國第四屆腦血管病學(xué)術(shù)會議制定的標(biāo)準(zhǔn)確診，共計40例。均系無血緣關(guān)系的大連漢族個體，年齡在46-88歲，并除外糖尿病、原發(fā)高血壓和腦腫瘤患者作為病例

4、組。隨機(jī)選取大連地區(qū)無償獻(xiàn)血志愿者133名，身體健康，體檢標(biāo)準(zhǔn)符合“全國采供血管理規(guī)范”。家族無遺傳病史，年齡在18-55歲，均無血緣關(guān)系作為對照組。留取外周血樣2ml EDTA抗凝，用Chelex-100法提取基因組DNA。按照引物序列合成上下游引物，上游引物5'端加熒光?；蜃鵇10S1248和D4S2364帶的熒光染料是6-FAM，發(fā)藍(lán)色熒光；基因座D14S1434和D2S441帶的熒光染料是HEX，發(fā)綠色熒光；基因座D22S10

5、45和D1S1677帶的熒光染料是TAMRA，發(fā)黃色熒光。應(yīng)用熒光標(biāo)記多重PCR擴(kuò)增技術(shù)在兩個同一反應(yīng)體系中同時擴(kuò)增3個基因座，分兩個反應(yīng)體系。310遺傳分析儀進(jìn)行毛細(xì)管電泳，用基因收集和分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)信息的收集并確定基因型。用直接計數(shù)法計算等位基因頻率和基因型頻率，應(yīng)用SPSS統(tǒng)計軟件對病例組和對照組的各基因座的各個等位基因間進(jìn)行卡方檢驗，計算OR值，并對有意義的OR值進(jìn)行假設(shè)檢驗。結(jié)果：1．等位基因和基因型：基因座D10S1248

6、，病例組和對照組分別檢測到等位基因8個和7個，基因型13種和18種；基因座D14S1434，病例組和對照組分別檢測到等位基因6個和8個，基因型12種和18種；基因座D22S1045，病例組和對照組分別檢測到等位基因6個和9個，基因型11種和19種；基因座D1S1677，病例組和對照組分別檢測到等位基因6個和8個，基因型10種和15種；基因座D2S441，病例組和對照組分別檢測到等位基因7個和9個，基因型14種和24種；基因座D4S236

7、4，病例組和對照組分別檢測到等位基因4個和5個，基因型7種和10種。2．等位基因頻率比較：基因座D10S1248和D22S1045的各個等位基因頻率病例組與對照組間均無顯著性差異?；蜃鵇14S1434在病例組中的等位基因14、基因座D1S1677的等位基因11、基因座D2S441病例組的等位基因14和基因座D4S2346的等位基因7的基因頻率在病例組和對照組間有顯著性差異。上述有差異的等位基因OR值分別為0.433、28.71、2.3