Caveolin-1基因沉默對人張氏肝細(xì)胞輻射敏感性及DNA損傷修復(fù)的影響.pdf

1、原發(fā)性肝癌是嚴(yán)重危害人類身體健康的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率均居惡性腫瘤的前三位，故肝癌的放射治療也受到大眾的廣泛關(guān)注。在臨床治療上，肝癌患者利用放射線可以部分殺死癌細(xì)胞，但是，放射線也會波及到周圍正常的肝細(xì)胞，使正常肝細(xì)胞受到放射線的損傷。因此，降低正常細(xì)胞輻射敏感性，是人們關(guān)注的問題。
　　 近年來研究表明，胞膜窖(Caveolae)的標(biāo)志性結(jié)構(gòu)分子窖蛋白-1(Caveolin-1，Cav-1)，除了與多種信號蛋白分子結(jié)

2、合，激活或抑制細(xì)胞內(nèi)不同信號通路外，也參與輻射后DNA損傷修復(fù)。細(xì)胞在經(jīng)放射線照射后，會造成DNA損傷，Cav-1在DNA損傷修復(fù)相關(guān)信號通路中均發(fā)揮重要的作用，但機(jī)制尚不清楚。
　　 本實(shí)驗(yàn)以人張氏肝細(xì)胞株CHL及本實(shí)驗(yàn)室前期利用RNA干擾技術(shù)建立的Cav-1基因沉默的人張氏肝CHL-CAV7細(xì)胞株為研究對象，觀察X射線照射對細(xì)胞克隆存活率、細(xì)胞周期以及DNA損傷修復(fù)等相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白表達(dá)的影響，探討Cav-1與細(xì)胞放射敏感性

3、及DNA損傷修復(fù)的關(guān)系，旨在闡明Cav-1作為細(xì)胞膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)平臺的標(biāo)志蛋白在應(yīng)對細(xì)胞放射損傷中的作用，為肝癌放射治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 結(jié)果如下：
　　 (1)Cav-1基因沉默增加細(xì)胞輻射敏感性。0-10Gy X射線照射后，CHL和CHL-CAV7細(xì)胞的克隆存活率減少，CHL-CAV7細(xì)胞的克隆存活率在8Gy X射線照射后與母細(xì)胞相比顯著減少；5Gy X射線照射后，CHL和CHL-CAV7細(xì)胞均發(fā)生G1期阻滯，CHL

4、-CAV7細(xì)胞在X射線照射后G1期阻滯程度高于對照組。
　　 (2)Cav-1基因沉默降低細(xì)胞DNA損傷修復(fù)能力。5Gy X射線照射后，CHL和CHL-CAV7細(xì)胞內(nèi)均有γH2AX蛋白的表達(dá)，CHL-CAV7細(xì)胞中γH2AX蛋白的表達(dá)在照射后15min與母細(xì)胞相比顯著增多；5Gy X射線照射后，CHL和CHL-CAV7細(xì)胞內(nèi)均有DNA損傷修復(fù)相關(guān)蛋白p-ATM及DNA-PKcs的表達(dá)，CHL-CAV7細(xì)胞中p-ATM及DNA-P

5、Kcs蛋白的表達(dá)在照射后15min與母細(xì)胞相比顯著減少。
　　 (3)Cav-l通過與Mdm2結(jié)合介導(dǎo)DNA損傷修復(fù)。5Gy X射線照射后，CHL和CHL-CAV7細(xì)胞內(nèi)Cav-1和Mdm2發(fā)生結(jié)合，CHL-CAV7細(xì)胞中Cav-1和Mdm2結(jié)合的細(xì)胞少于CHL細(xì)胞；5Gy X射線照射后，CHL-CAV7細(xì)胞內(nèi)p53蛋白表達(dá)降低。
　　 結(jié)論：Cav-1基因沉默通過p53-Mdm2負(fù)性調(diào)節(jié)增加人張氏肝細(xì)胞輻射敏感性，降低