核酸適配體AS1411對腫瘤細胞輻射敏感性影響研究.pdf

1、目的:本課題以HeLa細胞為研究對象,研究探討AS1411對人宮頸癌細胞HeLa的輻射敏感性的影響,通過檢測不同濃度AS1411預處理聯(lián)合X射線照射條件下HeLa細胞的存活率,以及觀察AS1411預處理聯(lián)合X射線對HeLa細胞DNA損傷修復、周期分布和凋亡的影響,研究AS1411對HeLa細胞輻射敏感性影響的作用機理。
　　方法:采用CCK-8法測定細胞活性,研究AS1411對HeLa細胞增殖-毒性的影響;克隆形成法觀測不同濃度A

2、S1411預處理聯(lián)合X射線照射對HeLa細胞存活率的影響;采用抗γ-H2AX抗體標記法來檢測DNA雙鏈斷裂,研究AS1411對X射線導致的HeLa細胞DNA雙鏈斷裂的影響;利用流式細胞術測定AS1411預處理聯(lián)合X射線照射對HeLa細胞周期分布、細胞阻滯和細胞凋亡的影響。
　　結果:
　　(1) CCK-8實驗結果顯示:不同濃度AS1411處理HeLa細胞24h、48h、72h, HeLa細胞存活率均大于94％,表明AS14

3、11的細胞毒性小。克隆形成實驗顯示:不同濃度AS1411預處理的HeLa細胞X射線照射后細胞存活率具有顯著性差異(P<0.05)。從吸收劑量-細胞存活曲線可以得出:低劑量區(qū)“肩區(qū)”同樣明顯縮小變窄,直線斜率部分增大,且各劑量點的存活率均低于對照組,這表明AS1411對HeLa細胞具有明顯的輻射增敏作用。
　　(2) DNA損傷實驗結果得到:經(jīng)AS1411預處理的HeLa細胞細胞核內(nèi)DNA斷裂數(shù)明顯增多。經(jīng)AS1411處理HeLa細

4、胞24h,細胞核內(nèi)DNA斷裂數(shù)明顯多于對照組;照射劑量為4Gy、8Gy時,加藥+照射組核內(nèi)DNA斷裂數(shù)明顯多于單純照射組,其濃度為1μmol/L照射劑量為4Gy、8Gy時細胞核內(nèi)DNA斷裂數(shù)分別是21.024±2.25和61.052±2.68,而單純照射組核內(nèi)DNA斷裂數(shù)分別是9.681±2.13和20.789±2.73。
　　(3)細胞周期實驗結果得出:經(jīng)不同濃度AS1411處理HeLa細胞后,細胞周期(G0/G1期、S期、G2

5、/M期)分布與對照組相比S期細胞增加;8GyX射線照射經(jīng)不同濃度AS1411預處理HeLa細胞出現(xiàn)G2/M期阻滯,但AS1411預處理并不影響輻射引起的G2/M期阻滯,這表明AS1411增加HeLa細胞的輻射敏感性的機制與細胞周期無關。
　　(4)細胞凋亡實驗結果顯示:AS1411可以促進輻射誘導的HeLa細胞的凋亡。經(jīng)AS1411預處理,500nmol/L組和1μmol/L組細胞早期凋亡率分別是7.71±1.51％、8.91±1

6、.04％,對照組細胞早期凋亡率是5.86±0.81％;照射劑量為4Gy、8Gy時,加藥+照射組細胞凋亡率高于單純照射組,照射劑量為4Gy時500nmol/L組和1μmol/L組的細胞早期凋亡率分別是19.67±1.90％和21.31±1.74％,單純照射組細胞早期凋亡率是15.44±2.41％;照射劑量為8Gy時500nmol/L組和1μmol/L組的細胞早期凋亡率分別是39.02±1.91％和41.99±0.65％,單純照射組細胞早期

7、凋亡率是35.90±2.92％。
　　結論:
　　(1) AS1411對HeLa細胞沒有顯現(xiàn)出細胞毒性作用?？寺⌒纬蓪嶒灲Y果表明AS1411對HeLa細胞具有明顯的輻射增敏作用。
　　(2) AS1411可以阻止輻射誘導的HeLa細胞DNA損傷的修復,這表明AS1411提高HeLa細胞的輻射增敏作用與其阻止細胞DNA損傷修復的作用有關。
　　(3) AS1411增加HeLa細胞的輻射敏感性的機制與細胞周期無關。<