IL-2增強Herceptin介導的腫瘤殺傷作用.pdf

1、背景：
　　 HER2基因的過度表達與乳腺癌的關系極為密切，它增加腫瘤細胞的侵襲力，破壞機體組織抗侵襲屏障，通過增加血管內皮生長因子的表達，促進腫瘤新生血管形成，促進癌細胞的擴散和轉移，參與化療耐藥的機制，抑制細胞凋亡，促進腫瘤細胞存活。這些特殊的分子生物功能奠定了HER2能作為乳腺癌生物治療靶點的理論基礎。Herceptin是一種人鼠嵌合型單克隆抗體，可選擇性地與HER2受體的胞外結構域結合。Herceptin可誘導腫瘤細胞表

2、面HER2受體內化，呈劑量依賴關系。抑制HER2與該家族的其它成員形成二聚體，阻礙酪氨酸激酶介導的細胞增殖信號傳入，下調cyclinD1表達水平，上調P27表達水平。經Herceptin處理后的腫瘤細胞，多數(shù)停留在G1期，S期數(shù)目減少，抑制腫瘤細胞的增殖活性。腫瘤細胞分泌VEGF(血管內皮生長因子)促進腫瘤組織內血管生成，獲得營養(yǎng)供應。Herceptin可以減少VEGF的產生，抑制腫瘤細胞生長。目前研究表明Herceptin通過介導AD

3、CC作用殺傷HER2受體陽性腫瘤細胞的效應是確定的，且殺傷作用與腫瘤細胞HER2受體的表達水平呈正比。在應用人源化單克隆抗體Herceptin進行抗腫瘤治療時，往往忽視了乳腺癌患者體內免疫效應細胞的質量和數(shù)量，以至于影響抗腫瘤治療的效果。有文獻報道晚期腫瘤患者外周CTL細胞和NK細胞數(shù)量減少，CD16表達水平低下，可能導致應用Herceptin進行抗腫瘤治療時效果不佳，此現(xiàn)象應該引起臨床醫(yī)務工作者的足夠重視，在應用單克隆抗體Hercep

4、tin進行抗腫瘤治療時輔以活化免疫效應細胞的細胞因子，可能提高抗腫瘤效果。
　　 目的：
　　 HER2屬酪氨酸激酶受體家族成員之一，在乳腺癌、卵巢癌、胃癌等多種惡性腫瘤中，有HER2基因過表達的現(xiàn)象，表現(xiàn)為腫瘤侵襲性增強、患者預后差。HER2是腫瘤生物治療的靶點，針對HER2胞外區(qū)的人源化單克隆抗體Herceptin主要通過介導ADCC作用有效抑制腫瘤細胞的增殖，并已廣泛應用于乳腺腫瘤治療。在應用
　　 Her

5、ceptin進行抗腫瘤治療時，乳腺癌患者免疫效應細胞的數(shù)量和質量將直接影響抗腫瘤治療的效果。本研究將探討乳腺癌患者外周血單個核細胞(PBMC)介導LAK樣殺傷作用和ADCC作用下降的機制，觀察IL-2增強乳腺癌患者PBMC介導殺傷作用的效果，為輔以細胞因子的靶向抗腫瘤治療新策略提供理論依據(jù)和實驗數(shù)據(jù)。
　　 方法：
　　 應用MTT法檢測健康對照組、早期乳腺癌患者、進展期乳腺癌患者、IL-2(1000U/ml，5d)處理

6、后進展期乳腺癌患者外周PBMC對SKBR3細胞的LAK樣殺傷作用；應用非核素細胞毒試劑盒(LDH釋放法)檢測由Herceptin介導的，健康對照組、早期乳腺癌患者、進展期乳腺癌患者、IL-2(1000U/ml，5d)處理后進展期乳腺癌患者外周血PBMC對SKBR3細胞的ADCC殺傷作用；應用流式細胞術檢測健康對照組、早期乳腺癌患者、進展期乳腺癌患者、IL-2(1000U/ml，5d)處理后進展期乳腺癌患者外周血CD3+CD8+T細胞、C

7、D3-CD56+NK細胞水平和CD16ζ的表達．
　　 結果：
　　 1．健康對照組、早期乳腺癌患者、進展期乳腺癌患者、IL-2(1000 U/ml，5d)處理后進展期乳腺癌患者外周血PBMC中CD3+CD8+T細胞所占比例分別是(24．5±4．2)％、(22．1±5．6)％、(17．7±5．1)％，(38．3±6．7)％。進展期乳腺癌患者外周血PBMC中CD3+CD8+T細胞水平較健康對照組明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(

8、P<0．05)。IL-2(1000 U/ml，5d)處理后進展期乳腺癌患者外周血PBMC中CD3+CD8+T細胞較處理前明顯增高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0．01=。
　　 2．在效靶比分別為5:1、10:1、20:1、40:1時，健康對照組外周血PBMC對SKBR3的LAK樣殺傷作用分別是(8．91±3．25)％、(14．77±3．07)％、(17．83±4．87)％、(25．29±2．31)％；早期乳腺癌患者外周血 PBMC對

9、SKBR3的LAK樣殺傷作用分別是(8．45±3．89)％(14．11±4．2)％(18．45±5．01)％(23．07±3．45)％；進展期乳腺癌患者外周血PBMC對SKBR3的LAK樣殺傷作用分別是(6．95±5．44)％、(11．56±7．25)％、(15．41±7．35)％、(20．11±5．21)％；IL-2(1000U/ml，5d)處理后進展期乳腺癌患者外周血PBMC對SKBR3的LAK樣殺傷作用分別是(14．79±5．19

10、)％、(20．14±7．7)％、(42．21±8．97)％、(51．07±7．36)％。進展期乳腺癌患者外周血PBMC對SKBR3的LAK樣殺傷作用較健康對照組降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0．05)。IL-2(1000 U/ml，5d)處理后進展期乳腺癌患者外周血PBMC對SKBR3的LAK樣殺傷作用較處理前明顯增高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0．05)。
　　 3．健康對照組、早期乳腺癌患者、進展期乳腺癌患者、IL-2(1000

11、U/ml，5d)處理后進展期乳腺癌患者外周血PBMC中CD3-CD56+NK細胞所占比例分別是(12．1±5．1)％、(11．8±6．3)％、(8．4±4．7)％、(14．1±3．2)％；CD16ζ的表達水平分別是(95．4±2．5)％、(92．1±3．9)％、(65．6±14．5)％、(90．4±5．7)％。進展期乳腺癌患者外周血PBMC中CD3-CD56+NK細胞所占比例和CD16ζ的表達水平較健康對照組、早期乳腺癌患者明顯降低，差

12、異有統(tǒng)計學意義(P<0．05)。IL-2(1000 U/ml，5d)處理后進展期乳腺癌患者外周血PBMC中CD3-CD56+NK細胞所占比例和CD16ζ的表達水平較處理前明顯增高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0．05)。
　　 4．在效靶比分別為5:1、10:1、20:1、40:1時，Herceptin介導的健康對照組外周血PBMC對SKBR3的ADCC殺傷作用分別是(36．5±8．7)％、(44．4±5．1)％、(53．7±7．9)

13、％、(63．1±10．1)％：Herceptin介導的早期乳腺癌患者外周血PBMC對SKBR3的ADCC殺傷作用分別是(32．7±10．3)％、(40．5±10)％、(54．1±9．9)％、(59．6±11．3)％；Herceptin介導的進展期乳腺癌患者外周血PBMC對SKBR3的ADCC殺傷作用分別是(20．0±5．1)％、(28．8±8．7)％、(35．2±7．8)％、(42．1±6．9)％；Herceptin介導的，IL-2(1

14、000 U/ml，5d)處理后進展期乳腺癌患者外周血PBMC對SKBR3的ADCC殺傷作用分別是(35．1±7．8)％、(47．7±9．2)％、(50．9±6．7)％、(66．9±7．8)％。各效靶比時，進展期乳腺癌患者外周血PBMC對SKBR3的ADCC殺傷作用較健康對照組均降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0．05)。IL-2(1000U/ml，5d)處理后進展期乳腺癌患者外周血PBMC對SKBR3的ADCC殺傷作用較處理前明顯增高，差異