異種（豬）骨酶法處理及用作骨修復(fù)材料的研究.pdf

1、骨缺損是骨科常見(jiàn)疾病，很多骨缺損由于間隙大而不能自然愈合。到目前為止，修復(fù)這些骨缺損的主要方法是骨移植。骨移植有自體骨移植、異體骨移植和異種骨移植三種。自體骨移植取骨區(qū)域有限及并發(fā)癥的存在以及異體骨同樣存在來(lái)源有限并有感染疾病的危險(xiǎn)，因此人們把目光轉(zhuǎn)向異種骨。 異種骨來(lái)源廣泛，但是未經(jīng)處理的異種骨不僅有傳染疾病的可能性而且有較嚴(yán)重的免疫排斥反應(yīng)。為此，人們已經(jīng)并正在研究異種骨用于骨缺損修復(fù)的較好的處理方法。目前研究較多的是采用氧

2、化劑的方法來(lái)處理異種骨以消除其中的抗原性，并取得一定進(jìn)展。但是采用氧化劑的方法造成了異種骨力學(xué)性能變差以及經(jīng)處理后的異種骨生物功能性不佳的缺點(diǎn)。所以，有必要尋找更好的處理方法以適應(yīng)骨修復(fù)的需要。 經(jīng)過(guò)異種骨成分分析以及考慮骨缺損修復(fù)對(duì)材料的要求，選擇用酶去除異種骨中非膠原蛋白而保留膠原蛋白和無(wú)機(jī)質(zhì)，從而既消除異種骨的抗原性又保證經(jīng)處理后的異種骨有較好的力學(xué)性質(zhì)和生物學(xué)性能。 選擇豬股骨密質(zhì)骨作為研究對(duì)象，異種骨的處理包括

3、前處理、脫脂、酶處理三個(gè)過(guò)程。以骨中氮的含量為指標(biāo)分析脫脂條件對(duì)異種骨脫脂的影響，當(dāng)異種骨中含氮量基本不變時(shí)為最佳脫脂條件。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)脫脂48小時(shí)即能夠脫除異種骨中的大部分脂肪。通過(guò)測(cè)定酶解溶出的羥脯氨酸量以確定酶處理中骨膠原蛋白的損失，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)酶處理對(duì)異種骨中膠原破壞較小，溶出的羥脯氨酸不超過(guò)0.55％。同時(shí)，酶處理后的異種豬骨拉伸強(qiáng)度沒(méi)有降低，表明酶處理對(duì)異種豬骨中膠原及膠原與無(wú)機(jī)質(zhì)的結(jié)合不造成有害影響。以色氨酸含量為指標(biāo)分析酶解條件

4、對(duì)去除非膠原蛋白的影響，發(fā)現(xiàn)濃度1％、pH8.0的酶溶液有較好效果。研究還發(fā)現(xiàn)，1％的低溫軟化酶作用時(shí)間應(yīng)至少在18小時(shí)以上才能較好地除去異種骨中非膠原蛋白。用紅外光譜檢測(cè)了解異種骨經(jīng)各次處理后的成分的變化，并用X射線衍射分析處理過(guò)程骨鹽結(jié)晶的破壞情況，發(fā)現(xiàn)異種骨經(jīng)處理后脂質(zhì)減少，羥基磷灰石結(jié)晶狀態(tài)變化不大。 為了了解異種骨經(jīng)處理后是否還存在強(qiáng)烈的抗原性，設(shè)計(jì)家兔橈骨中段1.5cm缺損，將酶處理后的異種骨植入。經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附染色