化瘀泄?jié)岱綄?duì)腎間質(zhì)纖維化實(shí)驗(yàn)大鼠整合素連接激酶的影響.pdf

1、目的：終末期腎臟病(end-stage renal disease， ESRD)的主要病理特征為腎纖維化，包括腎小球硬化及腎間質(zhì)纖維化(tubulointerstitial fibrosis， TIF)。研究表明，慢性腎臟病患者腎間質(zhì)纖維化的嚴(yán)重程度較腎小球病變更為重要。腎間質(zhì)纖維化主要表現(xiàn)為細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix ECM)的大量積聚和間質(zhì)肌成纖維細(xì)胞(Myofibroblast， MyoF)的增生。而腎小

2、管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化(renal tubular epithelial to mesenchymal transition， EMT)在TIF發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(transforming growth factor，TGF-β1)是目前所公認(rèn)的導(dǎo)致腎臟纖維化重要因子，它能通過(guò)多種途徑參與EMT。在TGF-β1誘導(dǎo)的EMT過(guò)程中整合素連接激酶(integrin linked kinase， ILK)起重要作用。研究提示T

3、GFβ1刺激呈時(shí)間和濃度依賴性誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞特異性表達(dá)ILK，同時(shí)ILK在TGF-β1/Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑介導(dǎo)的EMT過(guò)程中扮演重要的角色，最終導(dǎo)致了腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生。
　　 化瘀泄?jié)岱绞俏覀冊(cè)谂R床上用治慢性腎衰竭的常用方，取得了較好的臨床療效。同時(shí)前期的實(shí)驗(yàn)我們已經(jīng)證實(shí)，化瘀泄?jié)岱侥軌蛞种颇I間質(zhì)纖維化大鼠增殖細(xì)胞核抗原的表達(dá)，抑制腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化，并能夠通過(guò)調(diào)節(jié)TGFβ1/Smad信號(hào)通路發(fā)揮對(duì)腎間質(zhì)纖維化的拮抗作

4、用。如前所述，ILK可能因?yàn)閰⑴cTGF-β1/Smad信號(hào)通路和激活下游因子從而參與EMT的關(guān)鍵步驟，是EMT過(guò)程中的一個(gè)重要調(diào)節(jié)者，在腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中有重要作用。因此本研究進(jìn)一步探討化瘀泄?jié)岱綄?duì)腎間質(zhì)纖維化大鼠ILK的影響，為進(jìn)一步探討腎間質(zhì)纖維化發(fā)生、發(fā)展的機(jī)理，探討化瘀泄?jié)岱蕉嗤緩?、多靶點(diǎn)拮抗腎間質(zhì)纖維化的治療作用尋找實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：選用雌性、健康SD大鼠50只，體重（180±10）g，清潔級(jí)。普通飼料

5、適應(yīng)性喂養(yǎng)一周，檢測(cè)尿糖、尿紅細(xì)胞和尿蛋白均為陰性，隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、化瘀泄?jié)岱浇M、阿魏酸哌嗪分散片組、纈沙坦組，每組10只。除假手術(shù)組外其余各組均行左側(cè)輸尿管結(jié)扎術(shù)。手術(shù)前1日開始給藥，化瘀泄?jié)岱浇M大鼠經(jīng)口灌服化瘀泄?jié)岱?.7g/(kg·d)；阿魏酸哌嗪分散片組大鼠經(jīng)口灌服阿魏酸哌嗪分散片6.7mg/(kg·d)；纈沙坦組大鼠經(jīng)口灌服纈沙坦5.3mg/(kg·d)；假手術(shù)組和模型組予灌服同等量生理鹽水。給藥至實(shí)驗(yàn)結(jié)束前一天。全

6、部大鼠于實(shí)驗(yàn)第21日全部殺檢，摘取左側(cè)腎臟光鏡下觀察病理形態(tài)學(xué)變化，免疫組織化學(xué)法檢測(cè)腎組織ILK和Ⅲ型膠原(collagenⅢ，ColⅢ)表達(dá)，RT--PCR檢測(cè)腎組織ILKmRNA的表達(dá)，所有數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±S)表示，采用單因素方差分析對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件完成。
　　 結(jié)果：
　　 1.腎臟病理形態(tài)學(xué)觀察（見(jiàn)Fig1，5-14，Table1）：
　　 腎組

7、織行HE及Masson染色，結(jié)果顯示：模型組于腎間質(zhì)可見(jiàn)大量炎細(xì)胞的浸潤(rùn)和纖維組織的增生，腎小管嚴(yán)重萎縮，腎小球數(shù)量減少。其它各治療組間質(zhì)的炎細(xì)胞浸潤(rùn)以及纖維組織增生較模型組減少，腎小管萎縮程度較模型組輕，腎小球數(shù)量無(wú)明顯改變。
　　 2.ColⅢ的表達(dá)、分布及半定量分析結(jié)果（見(jiàn)Fig2，15-19，Table1）：
　　 主要表達(dá)于腎間質(zhì)。假手術(shù)組大鼠表達(dá)很弱，其余各組ColⅢ的表達(dá)顯著增強(qiáng)。與假手術(shù)組相比，模型組和各

8、治療組ColⅢ的表達(dá)顯著性增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；與模型組比較，化瘀泄?jié)岱浇M、阿魏酸哌嗪分散片組、纈沙坦組ColⅢ的表達(dá)減弱，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中，化瘀泄?jié)岱浇MColⅢ的表達(dá)弱于阿魏酸哌嗪分散片組（P＜0.05），其他各組間ColⅢ的表達(dá)均無(wú)明顯差異（P＞0.05）。
　　 3.ILK蛋白的表達(dá)、分布及半定量分析結(jié)果（見(jiàn)Fig3，20-24，Table2）：
　　 ILK主要表達(dá)于腎小管

9、上皮細(xì)胞胞漿中，假手術(shù)組ILK在腎小管上皮細(xì)胞中表達(dá)很弱。與假手術(shù)組比較，模型組和各治療組ILK的表達(dá)顯著增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；與模型組相比，化瘀泄?jié)岱浇M、阿魏酸哌嗪分散片組、纈沙坦組ILK的表達(dá)減弱，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，其中，化瘀泄?jié)岱浇MILK的表達(dá)優(yōu)于阿魏酸哌嗪分散片組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其他各組間均無(wú)明顯差異（P＞0.05）。2.5ILK mRNA的表達(dá)及半定量分析結(jié)果（見(jiàn)Fig4，

10、25-26，Table2）ILK RT-PCR半定量分析結(jié)果顯示，與假手術(shù)組比較，模型組和各治療組ILK的表達(dá)顯著增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；與模型組相比，化瘀泄?jié)岱浇M、阿魏酸哌嗪分散片組、纈沙坦組ILK的表達(dá)減弱，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中，化瘀泄?jié)岱浇MILK的表達(dá)弱于阿魏酸哌嗪分散片組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其他各組間均無(wú)明顯差異(P＞0，05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.化瘀泄?jié)?/p>