水稻Xa7介導(dǎo)抗白葉枯病應(yīng)答的信號(hào)途徑研究.pdf

1、水稻白葉枯病(Bacterail blight)是由稻黃單胞桿菌白葉枯致病變種(Xanthomonas oryzae pv.oryzae，Xoo)侵染所導(dǎo)致的一種細(xì)菌性病害，利用抗白葉枯病基因能有效地防治該病害。水稻抗白葉枯病基因Xa7是一個(gè)具有廣譜抗性的顯性基因，為了研究其在抗病應(yīng)答中的信號(hào)途徑機(jī)理，利用基因芯片分析了水稻IRBB7（含Xa7）和IR24（感病對(duì)照）接種白葉枯病菌24h、48h后的基因表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)IRBB7中有883

2、個(gè)特異的差異表達(dá)基因，IR24中有3055個(gè)特異的差異表達(dá)基因。
　　基因的差異表達(dá)從接菌后24h開始，此時(shí)IRBB7中有207個(gè)特異地差異基因，我們根據(jù)基因功能注釋將其分為病程相關(guān)因子、轉(zhuǎn)錄因子、信號(hào)傳導(dǎo)類、基礎(chǔ)代謝類和未知功能類。通過半定量RT-PCR和Real time-PCR的進(jìn)一步驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)一個(gè)未知功能的基因(Os03g0853200)在Xa7抗病應(yīng)答中被強(qiáng)烈誘導(dǎo)表達(dá)，但是卻不受Xa21抗病應(yīng)答的誘導(dǎo);而且，在沒有接菌的

3、水稻各組織中，該基因的表達(dá)非常低（除根外），接菌后在葉片的侵染處被迅速的誘導(dǎo)表達(dá);這些結(jié)果表明這個(gè)基因可能是一個(gè)受Xa7特異性調(diào)控的基因。Os03g0853200基因編碼一個(gè)含有四次跨膜結(jié)構(gòu)域的蛋白Tetraspanin，與動(dòng)物的CD9/CD37/CD63抗原家族蛋白同源，在遺傳進(jìn)化樹中與擬南芥的Tetraspanin3（簡(jiǎn)稱TET3）處于同一分枝，因此將該基因命名為OsTET3。通過PCR擴(kuò)增，從IRBB7和IR24中都克隆了OsTE

4、T3基因及其啟動(dòng)子，產(chǎn)物測(cè)序后發(fā)現(xiàn)兩品種間沒有序列的差異性。
　　我們構(gòu)建了OsTET3基因的過表達(dá)載體pCAMBLA1300-Pro35s∷OsTET3，經(jīng)農(nóng)感菌轉(zhuǎn)化到了水稻感病品種中花11愈傷組織中，并獲得了再生植株的小苗。同時(shí)，構(gòu)建表達(dá)載體pCAMBLA1300-Pro35s∷ OsTET3(∶)eGFP，發(fā)現(xiàn)在本氏煙中OsTET3可能定位在質(zhì)膜上。這些研究結(jié)果為進(jìn)一步分析OsTET3基因的功能及其在Xa7應(yīng)答途徑中的作用，