利用遺傳工程方法構(gòu)建高產(chǎn)甘油釀酒酵母菌株.pdf

1、作為一種重要的工業(yè)原料，甘油在生產(chǎn)中具有廣泛的應(yīng)用。發(fā)酵法生產(chǎn)甘油具有清潔安全等特點(diǎn)，越來越多地得到人們的關(guān)注。本文通過以下三條途徑提高酵母發(fā)酵過程中甘油的產(chǎn)量：(1)缺失編碼調(diào)節(jié)甘油跨膜運(yùn)輸?shù)牡鞍譌pslp的FPSl基因的N-末端區(qū)域；(2)缺失編碼3-磷酸甘油脫氫酶的GUT2基因；(3)缺失編碼線粒體外部NADH脫氫酶的兩個(gè)同功酶的NDEl和NDE2基因。其中(2)(3)途徑均為切斷胞質(zhì)NADH的線粒體呼吸鏈氧化反應(yīng)。本文以野生型釀

2、酒酵母菌株12-1為出發(fā)菌株，利用一步基因置換法缺失GUT2、NDEI租NDE2，利用兩步基因置換法部分缺失FPSI，利用遺傳學(xué)原理通過不同基因型酵母細(xì)胞的融合及等位基因的分離及遺傳分析對FPSI，GUT2，NDE1，NDE2四個(gè)基因修飾進(jìn)行組合，得到了15株不同的突變菌株。 對重組菌株12-l，12-1-f(fps1△)，12-1-fg(fps1△, gut2A::repeat)，12-1-fn12(fps1△,ndel△::

3、repeat,nde2△::repeat)和12-1-fgn12(fps1△，gut2△::repeat，ndel△::repeat，nde2△::repeat)進(jìn)行發(fā)酵實(shí)驗(yàn)和表型實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，12-1-fgn12不能利用甘油為唯一碳源生長，而能更好得利用乙醇作為唯一碳源生長。與野生型相比，12-1-fgn12在葡萄糖耗盡后，仍然可以生長并繼續(xù)生產(chǎn)甘油，其甘油產(chǎn)量從12h到24h持續(xù)增高；而12-1-f在葡萄糖耗盡后則主要利用甘油進(jìn)行