瓜子金皂苷己抑制神經(jīng)細(xì)胞缺血再灌注損傷及抗神經(jīng)炎癥作用的體外研究.pdf

1、缺血性腦血管病是臨床上最常見(jiàn)的腦血管病，是嚴(yán)重危害人類(lèi)健康與生存的主要疾病之一。腦缺血再恢復(fù)血供后，往往會(huì)出現(xiàn)缺血再灌注（ischemia-reperfusion， I/R）損傷，造成更嚴(yán)重的腦機(jī)能障礙，腦缺血后強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)也是造成腦組織繼發(fā)性損傷的重要因素。因此，抗腦I/R損傷已成為腦缺血治療中的重點(diǎn)，積極尋找有效的治療藥物以減輕腦I/R損傷，是降低患者死亡率和致殘率的重要手段。
　　瓜子金是我國(guó)民間常用中藥，具有祛痰、鎮(zhèn)靜、

2、抗炎和抗抑郁的功效。瓜子金皂苷己（polygalasaponin F，PGSF)是從瓜子金中提取的三萜皂苷單體化合物，研究資料顯示PGSF對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)具有非常廣泛的藥理活性，但其對(duì)腦I/R損傷影響的研究資料鮮有報(bào)道。故本課題選擇I/R損傷和與之相關(guān)的神經(jīng)炎癥作為研究方向，旨在探討PGSF對(duì)I/R損傷的神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用及其作用機(jī)制。
　　首先，本文采用MTT比色法和ELISA法從多個(gè)角度對(duì)PGSF的藥理活性進(jìn)行了初步篩選，結(jié)果表明

3、PGSF在體外去血清模型、H2O2氧化應(yīng)激模型、低糖低氧模型、MPP+擬帕金森氏癥模型中對(duì)PC12細(xì)胞均具有顯著的保護(hù)作用(P<0.01, P<0.05),并可以抑制LPS誘導(dǎo)的BV-2小膠質(zhì)細(xì)胞釋放TNF-α。
　　然后，采用 PC12和原代皮層神經(jīng)元建立物理性和化學(xué)性去氧兩種氧糖剝奪/復(fù)供(oxygen-glucose deprivation and reperfusion,OGD/R)模擬I/R模型，應(yīng)用MTT法、顯微鏡照相

4、、Hoechst33342/PI雙染、流式細(xì)胞術(shù)方法，證明10、1、0.1μmol/L濃度的PGSF可提高OGD/R損傷的神經(jīng)細(xì)胞的存活率，改善細(xì)胞形態(tài)和PC12細(xì)胞的細(xì)胞核形態(tài)，減輕細(xì)胞膜通透性受損程度，降低細(xì)胞的晚期凋亡/壞死百分率，提示 PGSF對(duì)OGD/ R損傷的神經(jīng)細(xì)胞具有保護(hù)作用；進(jìn)一步采用JC-1熒光染色法、DCF-DA熒光探針?lè)懊庖哂≯E法證明PGSF抗I/R損傷作用的機(jī)制可能與其維持細(xì)胞線粒體膜電位、減少細(xì)胞內(nèi)活性氧含

5、量、增加受損傷細(xì)胞的Bcl-2/Bax蛋白比值、降低P53蛋白及活性Caspase-3裂解片段表達(dá)有關(guān)。
　　最后，建立了LPS誘導(dǎo)BV-2小膠質(zhì)細(xì)胞神經(jīng)炎癥模型，從抗神經(jīng)炎癥的角度探討了PGSF抗缺血再灌注損傷的作用機(jī)制。應(yīng)用ELISA法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，PGSF可顯著抑制BV-2細(xì)胞釋放TNF-α、IL-1β和NO的生成(P<0.01, P<0.05)。免疫印跡和逆轉(zhuǎn)錄PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，PGSF可顯著抑制LPS誘導(dǎo)的BV-2細(xì)胞iN

6、OS和COX-2的蛋白和mRNA的表達(dá)，減少TNF-α和IL-1βmRNA的表達(dá)，并可降低LPS誘導(dǎo)的BV-2細(xì)胞 TLR4mRNA的表達(dá)水平，提示以上 PGSF抗神經(jīng)炎癥的效應(yīng)可能是通過(guò)阻斷TLR4介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路實(shí)現(xiàn)的。應(yīng)用LPS刺激BV-2小膠質(zhì)細(xì)胞的條件培養(yǎng)基對(duì)PC12細(xì)胞造成損傷的模型中，PGSF可顯著提高PC12細(xì)胞存活率，在體外試驗(yàn)中證明了PGSF可以通過(guò)抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的激活而抑制炎癥對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的損傷。
　　綜上所