室間隔缺損血清候選蛋白標(biāo)志物FN驗(yàn)證研究.pdf

1、先天性心臟病(Congenital Heart Disease,CHD)是人類最為常見(jiàn)的先天性畸形,是嬰幼兒期非感染死亡的首位病因。而室間隔缺損(ventricular septal defect,VSD)是CHD中最為常見(jiàn)的一種先天性心臟畸形,在出生缺陷中占有重要地位。VSD的病因和發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜,可能涉及多種因素、多個(gè)基因和多條信號(hào)通路的改變,以往的研究主要集中在環(huán)境危險(xiǎn)因素、遺傳基因等領(lǐng)域,但是要完整了解VSD發(fā)生的機(jī)制,必須要

2、了解心臟在異常分化發(fā)育的過(guò)程中與之密切相關(guān)蛋白質(zhì)組及其功能。我們前期研究應(yīng)用同位素標(biāo)記相對(duì)和絕對(duì)定量(iTRAQ)技術(shù)結(jié)合LC-MALDI-TOF/TOF方法篩選出21種與VSD相關(guān)的血清差異表達(dá)蛋白質(zhì),其中VSD組較健康對(duì)照組表達(dá)量上調(diào)≥1.5倍的蛋白質(zhì)有13種,下調(diào)≤0.67倍的蛋白質(zhì)有8種。根據(jù)鑒定到肽段的匹配、置信度,纖維連接蛋白(Fibonectin,FN)很可能作為VSD患者血清候選蛋白標(biāo)志物。本課題擬應(yīng)用免疫印跡法(Wes

3、tern blot,WB)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)技術(shù)對(duì)前期工作鑒定到的VSD患者血清候選蛋白標(biāo)志物FN進(jìn)行表達(dá)驗(yàn)證,然后對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析,從蛋白組學(xué)角度探索VSD的發(fā)病機(jī)制,同時(shí)為應(yīng)用生物標(biāo)志物在孕早期診斷CHD做出基礎(chǔ)工作。
　　目的:驗(yàn)證纖維連接蛋白(Fibronectin,FN)作為室間隔缺損血清蛋白標(biāo)志物的可能性并對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析。<

4、br>　　方法:收集室間隔缺損(Ventricular septal defect,VSD)組、房間隔缺損(Atrial septal defect,ASD)組、法洛四聯(lián)癥(Tetralogy of Fallot,TOF)組和健康體檢組血清樣本各20例,應(yīng)用免疫印跡法(Western blot,WB)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)檢測(cè)血清樣本中FN表達(dá)水平;利用生物信

5、息學(xué)的方法對(duì)FN的基本理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)、功能、代謝途徑,網(wǎng)絡(luò)調(diào)控等方面進(jìn)行全面分析。
　　結(jié)果:1.免疫印跡法檢測(cè)結(jié)果顯示,FN在VSD組、ASD組、TOF組和健康體檢組血清中均能檢測(cè)到,但在VSD組中的表達(dá)水平明顯高于其它三組(p<0.05)。2.ELISA檢測(cè)顯示VSD組患者血清中FN濃度為(67.08±27.67)ug·L-1,ASD組患者為(37.65±15.07)ug·L-1、TOF組患者為(28.08±11.24)ug·

6、L-1、健康體檢組為(31.15±11.18)ug·L-1,四組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05);進(jìn)一步進(jìn)行兩兩比較,VSD組與其它三組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),而其它三組差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。3.生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)FN是分子量為250kDa亞單位組成的糖蛋白二聚體,是細(xì)胞外基質(zhì)中重要的細(xì)胞粘附分子,它的一條氨基酸鏈含有2386個(gè)氨基酸,262624.5Da,pI=5.46,具有調(diào)節(jié)細(xì)胞粘附、增殖、分化,促進(jìn)細(xì)