某地區(qū)獻血員及白血病患者中隱匿性乙型肝炎病毒感染的分子流行病學調(diào)查.pdf

1、目的:了解某地區(qū)獻血員及HBsAg陰性的白血病患者中隱匿性HBV感染的檢出率,并探討其與研究對象年齡、性別、生化學檢測結(jié)果以及乙型肝炎病毒標志物之間的關系,同時從S基因變異角度探討隱匿性HBV感染可能的分子機制。
　　方法:①病例選擇和標本收集:收集2010年6月~2010年9月間經(jīng)某地區(qū)血站篩查HBsAg陰性的合格獻血員血漿594份。另收集2010年9月~2010年10月間某地區(qū)三甲醫(yī)院檢驗科檢驗結(jié)果為HBsAg、抗-HBc定量

2、檢測雙陽性且HBV DNA陽性的HBV感染者做對照。87份HBsAg陰性的白血病患者血清標本均來自2010年8月至2010年12月間在某地區(qū)三甲醫(yī)院血液科確診為白血病的患者(包括急性及慢性白血病患者)。②HBV DNA提取:采用經(jīng)典蛋白酶K消化-酚/氯仿法。③巢式PCR法檢測HBV DNA:參考國內(nèi)外文獻及HBV參照序列,在HBV基因組S、C、X區(qū)分別設計一對巢式引物。巢式PCR擴增,當任兩個區(qū)同時陽性者定義為隱匿性HBV感染者。④雅培

3、Architect I2000R電化學發(fā)光儀定量檢測隱匿性HBV感染者的HBV血清學標志物,對隱匿性HBV感染者與非感染者進行性別、年齡、生化學檢測結(jié)果以及HBV血清標志物等的比較。⑤擴增HBV DNA陽性者小S區(qū)測序:根據(jù)HBV參照序列,在S區(qū)設計引物,對隱匿性HBV感染者以及11例HBsAg和抗-HBc雙陽性的HBV感染者進行擴增測序,并進行基因型、HBsAg“α”決定簇突變分析,發(fā)現(xiàn)可能和隱匿性HBV感染有關的變異位點。
　

4、　結(jié)果:一、獻血員:①在594例獻血員中有15例為隱匿性HBV感染,隱匿性HBV感染的發(fā)生率為2.5％(15/594)。未發(fā)現(xiàn)HBV血清學標志物檢測結(jié)果與隱匿性HBV感染有相關性。②將獻血員中隱匿性HBV感染者和陽性對照ⅠS區(qū)的測序序列與HBV標準序列相比較,結(jié)果共檢測到2種基因型(HBV/B, HBV/C),其中HBV/B基因型占優(yōu)勢,10例隱匿性HBV感染者HBV基因型分別為HBV/B(9例),HBV/C(1例),而11例陽性對照Ⅰ

5、HBV基因型分別為HBV/B(10例),HBV/C(1例)。隱匿性HBV感染者和陽性對照Ⅰ相比較,兩者的基因型分布并無統(tǒng)計學意義。③獻血員中,15例隱匿性HBV感染者中共10人有S區(qū)測序結(jié)果,其HBV DNA均有不同程度的變異,其中共有3例在“a”決定簇內(nèi)出現(xiàn)氨基酸突變,分別為I126T(1例)、T140I(2例)。與隱匿性HBV感染者相比,陽性對照Ⅰ在“a”決定簇內(nèi)僅出現(xiàn)了1例T131N變異。
　　二、白血病:①在87例HBsA

6、g陰性的白血病中,隱匿性感染者有15例,隱匿性 HBV感染的檢出率為17.2%(15/87)。實驗組的年齡、性別分布、生化學檢測結(jié)果等與對照組相比,差別無統(tǒng)計學意義。②在白血病患者中隱匿性HBV感染的抗-HBc陽性的檢出率(46%,7/15)顯著高于對照組中抗-HBc陽性檢出率(9.7%,7/72)(χ2=12.548, P﹤0.001),即在白血病患者中抗-HBc陽性與否,與隱匿性感染有顯著相關性。③白血病患者中隱匿性 HBV感染者共

7、檢測到2種基因型(HBV/B, HBV/C),其中HBV/C基因型占優(yōu)勢,11例隱匿性HBV感染者HBV基因型分別為HBV/C(10例),HBV/B(1例),與獻血員中隱匿性HBV感染者的測序結(jié)果差別較大。④白血病中,15例隱匿性HBV感染者中共11人有S區(qū)測序結(jié)果,其中1例隱匿性HBV感染者出現(xiàn)了插入突變,另2例提前形成終止密碼,形成縮短的氨基酸序列,并有6例有氨基酸突變存在。在不同基因型的隱匿性HBV感染者中,在MHR區(qū)存在變異的5

8、例基因型C病毒株均發(fā)生了I126T變異,而唯一1例基因型B病毒株發(fā)生的是Q129R、D144E、S155Y聯(lián)合變異。
　　結(jié)論:①在本地區(qū)獻血員及HBsAg陰性的白血病患者中隱匿性HBV感染的檢出率分別為2.5%和17.2%。②在白血病患者中,抗-HBc陽性與隱匿性HBV感染有明顯的相關性。③白血病患者中隱匿性HBV感染者與本地區(qū)慢性HBV感染者基因型有顯著不同。④HBV S區(qū)基因變異尤其是HBsAg“α”決定簇存在氨基酸改變可能