ASIC-3在小鼠轉(zhuǎn)移性腫瘤癌痛模型中的表達及作用.pdf

1、癌痛是一類廣泛存在于腫瘤患者群體中，臨床常見的慢性頑固性疼痛，嚴重影響著病患個體及家庭的生活質(zhì)量。治療上，受限于成癮性、耐受性差等缺點，世界衛(wèi)生組織（World Health Organization，WHO）推薦的“三階梯止痛方案”及阿片類藥物的應(yīng)用，暫未能達到令人滿意的鎮(zhèn)痛效果。目前，針對疼痛形成、傳導(dǎo)過程中有關(guān)酸敏感離子通道(acid-sensing ion channels，ASICs)參與作用的研究日漸增多。現(xiàn)已知缺氧和組織酸

2、化是實體腫瘤微環(huán)境的重要特征，可以通過進一步了解ASICs在癌痛形成過程中的相關(guān)變化，來為我們在腫瘤患者的鎮(zhèn)痛治療上提供新的方向和思路。本研究擬通過建立小鼠轉(zhuǎn)移性足跖皮膚癌痛模型，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcriptionPCR，RT-PCR)、蛋白質(zhì)免疫印跡試驗(Western blotting)技術(shù)，檢測腫瘤生長期內(nèi)不同時間點酸敏感離子通道-3(ASIC-3)在小鼠脊髓背根神經(jīng)節(jié)（dorsal root ga

3、nglion，DRG）和腫瘤原位上mRNA、蛋白表達量的變化;并結(jié)合其抑制劑天麻素在癌痛中的應(yīng)用，通過檢測小鼠疼痛行為學表現(xiàn)和DRG中ASIC-3的表達變化，來探討ASIC-3與癌痛產(chǎn)生的相關(guān)性，為臨床癌痛的基礎(chǔ)研究和鎮(zhèn)痛藥物藥理學分析提供幫助。
　　第一章 小鼠轉(zhuǎn)移性足跖皮膚癌痛模型的建立
　　目的:建立小鼠轉(zhuǎn)移性足跖皮膚癌痛模型。
　　方法:選取21只Balb/c系小鼠，雌性，8周齡，體重20～25g，完全隨機分為

4、3組，每組7只:正常組、假手術(shù)組和癌痛組。癌痛組每只小鼠左后趾跖面皮下注射20μl包含約2×105數(shù)量4T1小鼠乳腺癌細胞的PBS混懸溶液，假手術(shù)組小鼠注射等劑量的PBS溶液，正常組不作任何處理。觀察實驗各組小鼠4T1乳腺癌細胞接種前及接種后1、3、5、7、9、11、14天一般情況、腫瘤接種側(cè)足趾軟組織外觀、小鼠無痛行走行為學評分、熱板試驗誘發(fā)小鼠熱刺激爪回縮閾值改變結(jié)果。
　　結(jié)果:正常、假手術(shù)兩組間比較，造模后小鼠無痛行走行為

5、學評分和熱刺激爪回縮閾值改變，記錄數(shù)據(jù)無統(tǒng)計學差異(P＞0.05);與正常組、假手術(shù)組比較，癌痛組小鼠腫瘤接種后第5日起，接種側(cè)足趾軟組織瘤體漸增大，無痛行走評分開始逐漸升高，第7日起，熱刺激爪回縮閾值出現(xiàn)逐步縮短(P＜0.05);致第11天，無痛行走行為學評分與熱刺激爪回縮閾值均達峰值(P＜0.01);致第14天后，因瘤體生長過快，部分小鼠出現(xiàn)軟組織破潰、出血，影響測試結(jié)果，決定終止實驗。
　　結(jié)論:小鼠轉(zhuǎn)移性足跖皮膚癌痛模型成

6、功建立。
　　第二章 ASIC-3在轉(zhuǎn)移性足跖皮膚癌痛小鼠脊髓表達的變化
　　目的:檢測ASIC-3在癌痛小鼠DRG神經(jīng)元與腫瘤原位上表達的變化。
　　方法:癌痛動物模型的建立方法同第一部分。分別摘取正常組、假手術(shù)組小鼠與癌痛組腫瘤接種5、9、14天后小鼠L4-5節(jié)段脊髓DRG組織和腫瘤原位皮膚組織，采用RT-PCR、Western blotting技術(shù)檢測小鼠不同腫瘤生長期內(nèi)，DRG與腫瘤原位上ASIC-3mRNA和

7、蛋白表達量的相關(guān)改變。
　　結(jié)果:正常、假手術(shù)兩組間比較，小鼠脊髓DRG、腫瘤原位上ASIC-3 mRNA、蛋白表達水平差距無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);與正常組、假手術(shù)組比較，癌痛組腫瘤接種后第5天，小鼠脊髓DRG、腫瘤原位上ASIC-3 mRNA、蛋白表達水平呈現(xiàn)逐漸升高趨勢(P＜0.05);第9日起致第14天，升高趨于明顯(P＜0.01)。
　　結(jié)論:轉(zhuǎn)移性足跖皮膚癌痛組小鼠腫瘤細胞接種后，其脊髓DRG、腫瘤原位上AS

8、IC-3 mRNA、蛋白表達水平呈增強表現(xiàn)。
　　第三章 天麻素在小鼠轉(zhuǎn)移性癌痛中的鎮(zhèn)痛作用
　　目的:研究天麻素對小鼠轉(zhuǎn)移性腫瘤誘發(fā)癌痛的鎮(zhèn)痛作用。
　　方法:癌痛小鼠模型建立方法同第一部分。選取35只Balb/c系小鼠，雌性，8周齡，體重20～25g，完全隨機分為5組，每組7只:正常組、假手術(shù)組、天麻素低劑量組(90mg/kg)、天麻素高劑量組(180mg/kg)和嗎啡組。于造模后第11天，小鼠給藥后第15、30、

9、60、90、120、150、180分鐘，行熱板試驗，檢測熱刺激爪回縮閾值變化。并檢測高劑量組ASIC-3 mRNA在小鼠DRG神經(jīng)元上相應(yīng)的變化，方法同第二部分。
　　結(jié)果:與正常組、假手術(shù)組比較，給藥后第60分鐘，低、高劑量天麻素組小鼠熱刺激爪回縮閾值均出現(xiàn)延長(P＜0.05)，第90分鐘，達到峰值(P＜0.01)。與嗎啡組比較，兩組閾值增加幅度均小于嗎啡組(P＜0.05)。高劑量天麻素組ASIC-3 mRNA表達明顯低于其他組