診斷超聲聯(lián)合微泡對大鼠皮下移植肝癌血管通透性影響及其機制的實驗研究.pdf

1、背景:
　　原發(fā)性肝癌是目前臨床最常見的惡性腫瘤之一,具有惡化速度快、復(fù)發(fā)率高、治療效果差、生存時間短等特點,居目前全球腫瘤相關(guān)死亡第三位,在我國腫瘤相關(guān)死亡中居第二位,因此,其治療問題尤顯重要?；熓悄壳案伟┚C合治療中最常用的方法,其效果取決于藥物在腫瘤局部的濃度與作用時間,系統(tǒng)化療時因為聚集于腫瘤局部的藥物濃度低,而全身血液循環(huán)中藥物濃度相對較高,易引起全身嚴(yán)重的毒副作用。因此,發(fā)展一種既達到最佳抗腫瘤效果又不致引起全身嚴(yán)重毒

2、副作用的方法是臨床腫瘤治療的熱點和難點。
　　國內(nèi)外研究均表明超聲靶向破壞微泡是一種能夠有效、無創(chuàng)的提高藥物或基因滲入腫瘤組織的新型物理治療技術(shù)。該方法通過注射一定劑量的超聲微泡,并給予一定功率的超聲輻照使微泡發(fā)生破裂,通過產(chǎn)生的空化效應(yīng)、聲孔效應(yīng)等導(dǎo)致微血管及細(xì)胞膜通透性升高,以提高抗腫瘤藥物的生物利用度。目前,文獻報道中多使用高強度的聚焦超聲治療儀介導(dǎo)微泡破壞進行相應(yīng)的實驗研究,可明顯提高藥物或基因的生物利用度。
　　使

3、用超聲治療儀器不僅缺乏相關(guān)的圖像引導(dǎo)系統(tǒng),而且對深部腫瘤組織缺乏足夠的穿透力。因此,對于較大范圍的治療靶區(qū),我們不妨采用更普及、更簡便的診斷超聲作為工具,通過超聲輻照腫瘤區(qū)域破壞微泡來提高靶區(qū)微血管及腫瘤細(xì)胞膜的通透性,介導(dǎo)藥物的傳輸。相關(guān)文獻也證實了此設(shè)想的可行性,但關(guān)于該技術(shù)有效實驗參數(shù)不一致,針對其具體機制的研究較少,因此我們設(shè)計了本課題研究。
　　目的:
　　1.探討高機械指數(shù)診斷超聲聯(lián)合微泡對大鼠皮下移植性肝癌血管

4、通透性的影響,使用定性和定量方法進行評估,證明該技術(shù)方法的有效性;
　　2.探索不同機械指數(shù)、不同超聲輻照時間以及不同微泡劑量對診斷超聲聯(lián)合微泡條件下提高腫瘤血管通透性的影響,優(yōu)化此技術(shù)應(yīng)用的參數(shù);
　　3.初步探討診斷超聲聯(lián)合微泡技術(shù)引起腫瘤血管通透性改變的細(xì)胞及分子生物學(xué)水平的機理。
　　方法:
　　1.以伊文氏藍作為判斷血管通透性改變的指示劑,將已建立皮下移植肝癌模型成功的SD大鼠隨機分為空白對照組、單純微

5、泡組、單純診斷超聲輻照組、診斷超聲聯(lián)合微泡組共四組進行實驗,通過定性和定量的方法檢測診斷超聲聯(lián)合微泡條件下腫瘤血管通透性改變的情況。
　　2.以腫瘤組織中伊文氏藍含量作為血管通透性改變的指示劑,通過定量的方法檢測不同機械指數(shù)、不同超聲輻照時間以及不同微泡劑量對診斷超聲聯(lián)合微泡條件下腫瘤血管通透性的改變。
　　3.以能反應(yīng)腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞活化及受損的P-selectin蛋白作為評價指標(biāo),分別采用Westernblot及免疫組織

6、化學(xué)的方法對各處理組腫瘤組織中蛋白表達水平進行定量和定性分析,進而判斷診斷超聲聯(lián)合微泡條件下腫瘤血管通透性影響的可能機制。
　　4.使用透射電鏡觀察腫瘤血管通透性改變發(fā)生的部位,從超微結(jié)構(gòu)了解診斷超聲聯(lián)合微泡條件下腫瘤血管通透性改變的主要機制。
　　結(jié)果:
　　1.使用伊文氏藍作為指示劑通過定性和定量的方法檢測診斷超聲聯(lián)合微泡條件下腫瘤血管通透性改變的情況:診斷超聲聯(lián)合微泡組腫瘤組織中滲出的伊文氏藍含量明顯高于其余各實

7、驗組,差異有明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);
　　2.在一定范圍內(nèi)隨著機械指數(shù)的升高、超聲輻照時間的延長、微泡濃度的增加,腫瘤組織中滲出的伊文氏藍含量均有明顯增加;
　　3.使用Westernblot及免疫組織化學(xué)的方法對P-selectin蛋白在各實驗組的表達情況進行定量和定性分析:結(jié)果顯示在超聲聯(lián)合微泡組腫瘤組織蛋白水平在血管壁周圍表達高于其他各實驗組,提示血管內(nèi)皮細(xì)胞活化或細(xì)胞通透性增加可能是血管通透性增加的因素之一;

8、
　　4.透射電鏡超微結(jié)構(gòu)觀察可見診斷超聲聯(lián)合微泡組腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹明顯,線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等結(jié)構(gòu)水腫,細(xì)胞膜完整性中斷。
　　結(jié)論:
　　1.在一定條件下,診斷超聲聯(lián)合微泡可明顯提高輻照腫瘤組織血管通透性,為提高化療藥物的生物利用度提供了新方法;
　　2.機械指數(shù)、微泡濃度、超聲輻照時間均是影響診斷超聲聯(lián)合微泡提高腫瘤血管通透性的主要因素;
　　3.診斷超聲聯(lián)合微泡提高腫瘤血管通透性增加的機制主要是影響血