腺相關(guān)病毒載體AAV-hVEGF-,165-的構(gòu)建及hVEGF-,165-與TGFβ1對(duì)椎間盤纖維環(huán)細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng).pdf

1、　　目的：構(gòu)建人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(humanvascularendothelialgrowthfactor，hVEGF165)腺相關(guān)病毒(adeno-associatedvirus，AAV)載體AAV-hVEGF165，并體外檢測(cè)其在椎間盤纖維環(huán)細(xì)胞中的表達(dá)，以及觀察AAV-hVEGF165與AAV-TGFβ1(transforminggrowthfactorbeta1，TGFβ1)基因聯(lián)合轉(zhuǎn)染對(duì)纖維環(huán)細(xì)胞Ⅰ型膠原的生物學(xué)效應(yīng)。探討應(yīng)用

2、hVEGF165基因逆轉(zhuǎn)椎間盤退變可行性?！　》椒ǎ翰捎梅肿涌寺〖夹g(shù)，從pcDNA3(+)-hVEGF165質(zhì)粒獲得hVEGF165cDNA，并克隆至AAV包裝質(zhì)粒pSNAV上，構(gòu)建成pSNAV-hVEGF165的AAV重組質(zhì)粒，經(jīng)酶切及測(cè)序鑒定正確，用脂質(zhì)體介導(dǎo)pSNAV-hVEGF165轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞(VEC)，熒光免疫組化方法檢測(cè)hVEGF165蛋白，并用MTT法測(cè)定hVEGF165對(duì)VEC增殖的影響。由本元

3、正陽公司對(duì)鑒定正確的pSNAV-hVEGF165進(jìn)行AAV-hVEGF165的包裝。AAV-hVEGF165與AAV-TGFβ1聯(lián)合轉(zhuǎn)染原代培養(yǎng)的椎間盤纖維環(huán)細(xì)胞，Westernblotting檢測(cè)hVEGF165與TGFβ1的表達(dá)以及纖維環(huán)細(xì)胞Ⅰ型膠原表達(dá)量的變化。　　結(jié)論：構(gòu)建的腺相關(guān)病毒載體AAV-hVEGF165可在體外表達(dá)，hVEGF165在體外能夠協(xié)同TGFβ1促進(jìn)纖維環(huán)細(xì)胞Ⅰ型膠原表達(dá)的增加，hVEGF165有可能基因逆