小麥小GTP結合蛋白基因TaRab2和TaRab7的分離與鑒定.pdf

1、干旱是嚴重影響植物生長發(fā)育的重要環(huán)境脅迫因子之一，植物的抗旱性反應是一個涉及到眾多基因，受多途徑調(diào)控的復雜過程，并且不同的植物對脅迫的反應和適應也是復雜的和高度可變的。小麥是世界上第一大糧食作物，全面了解小麥抗旱機制、利用轉(zhuǎn)基因技術培育高效抗旱新品種對保障世界糧食生產(chǎn)具有重要意義。本研究旨在克隆小麥抗旱相關基因，驗證其功能，探討其抗旱機制，為解析復雜的抗旱調(diào)控網(wǎng)絡提供分子基礎。主要的研究進展如下： 通過對小麥幼苗水分脅迫誘導表達

2、cDNA文庫的篩選，采用電子克隆和RT-PCR技術，獲得與Rab2和Rab7基因高度同源的小GTP結合蛋白基因TaRab2和TaRab7。Southern雜交以及來自普通小麥及其二倍體供體材料的序列分析結果表明，TaRab2在小麥A、B、D基因組上都是單拷貝的，且不同基因組成員編碼的蛋白序列完全相同；TaRab7有兩種編碼序列，其中的一種由于16bp的插入而導致蛋白序列提前終止。通過在大腸桿菌中過量表達，并經(jīng)親和層析純化獲得了TaRab

3、2和TaRab7兩個基因的完整編碼產(chǎn)物，進一步的實驗表明它們均具有GTP結合功能。RT-PCR和Northern雜交結果表明：TaRab2在小麥種子萌發(fā)期表達量較高，隨著苗齡的增長，表達量呈下降趨勢，當幼苗受干旱和鹽脅迫時，TaRab2表達明顯升高；而TaRab7受干旱和ABA誘導上調(diào)表達。轉(zhuǎn)基因擬南芥分析表明，TaRab2過表達能提高轉(zhuǎn)基因擬南芥在萌發(fā)期對滲透脅迫的抗性，且早期生長較野生型快速；TaRab7表達能提高轉(zhuǎn)基因植株對滲透脅