四川部分地區(qū)J亞型禽白血病分子流行病學(xué)調(diào)查及一株ALV-J流行株對(duì)ND-IB活疫苗免疫反應(yīng)的影響.pdf

1、J亞群禽白血病病毒(Subgroup J of Avian leukosis virus，ALV-J)由外源性禽白血病病毒和禽內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒囊膜(E51)重組而形成，是一種新的禽白血病亞群。雞群感染后除了能引起腫瘤外，還可導(dǎo)致免疫抑制，給養(yǎng)雞生產(chǎn)帶來(lái)嚴(yán)重的損失。分析目前流行的J亞型禽白血病病毒的分子特征，觀(guān)察流行株感染對(duì)雞疫苗的免疫反應(yīng)的影響，對(duì)于認(rèn)識(shí)了解四川地區(qū)當(dāng)前流行毒株的分子變異情況和科學(xué)評(píng)價(jià)ALV-J感染對(duì)現(xiàn)有疫苗的免疫效果的

2、具體影響顯得十分重要。
　　在2011年到2013年這3年時(shí)間里，我們通過(guò)用PCR的方法從中國(guó)四川省地區(qū)的839份血液和組織樣品中共檢測(cè)到了62份陽(yáng)性樣本，樣本主要來(lái)自7個(gè)市縣的14個(gè)雞場(chǎng)，其中726份血液樣品中，檢出39份陽(yáng)性樣本;113份組織樣品中，檢出23份陽(yáng)性樣本。雞群的平均感染率為7.4％。成功克隆并測(cè)序了20個(gè)樣本的gp85基因，使用DNAstar軟件與從GenBank上獲得的其他一些參考毒株序列進(jìn)行核苷酸和氨基酸序列

3、的同源性分析，結(jié)果顯示，20個(gè)陽(yáng)性樣品的gp85基因核苷酸同源性為87.3％～99.8％，與ALV-J原型株HPRS-103的核苷酸同源性為87.3％～98.2％，與四川首例J亞型禽白血病分離株SCGS-1的核苷酸同源性為87.9％～94.4％。以HPRS-103為參考株，發(fā)現(xiàn)了有兩個(gè)獨(dú)特的氨基酸突變位點(diǎn)在四川大部分的測(cè)序樣品中呈現(xiàn)特征性的規(guī)律，分別位于第209位和246位。在20個(gè)測(cè)序樣品中，E209K/N點(diǎn)突變占85％(17/20)

4、，其中突變?yōu)镵的有14個(gè)，突變?yōu)镹的有3個(gè);E246K/N/R點(diǎn)突變占85％(17/20)，其中突變?yōu)镵的有12個(gè)、N的有4個(gè)及R的有1個(gè)。遺傳進(jìn)化分析表明，20個(gè)樣品分別屬于4個(gè)不同的分支。來(lái)自石棉的樣品SM與其他樣品的遺傳距離最遠(yuǎn)。通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)，分離出1株ALV-J毒株并命名為SCYANC1260株。取1日齡白羽肉雞，腹腔接種ALV-J株SCYANC1260病毒液，7日齡時(shí)通過(guò)點(diǎn)眼或滴鼻進(jìn)行新支二聯(lián)活疫苗的免疫，然后定期采血分離血清

5、，用血凝抑制實(shí)驗(yàn)和ELISA實(shí)驗(yàn)分別測(cè)定NDV和IBV的抗體滴度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:新支二聯(lián)活疫苗免疫14天后，ALV-J SCYANC1260株感染組的抗體水平顯著低于未感染ALV-J組，且隨著時(shí)間的推移，二者之間差異越來(lái)越大，從而證實(shí)ALV-J感染對(duì)ND和IB疫苗免疫反應(yīng)有較強(qiáng)的免疫抑制作用。
　　總而言之，通過(guò)把本研究中獲得的測(cè)序樣品序列與GenBank上發(fā)表的其他參考毒株序列比對(duì)分析揭示了中國(guó)四川部分地區(qū)流行毒株的gp85基因