二氮嗪預(yù)處理對在體大鼠缺血-再灌注心肌細(xì)胞膜Cx43基因及蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的：大鼠在體心肌缺血/再灌注(IR)模型上，觀察二氮嗪預(yù)處理對減輕IR損傷時的心肌細(xì)胞膜連接蛋白Cx43(connexin 43，Cx43)mRNA的相對表達(dá)量、磷酸化和非磷酸化蛋白水平及細(xì)胞內(nèi)空間分布的影響；觀察PKC特異性抑制劑白屈菜季銨堿對二氮嗪預(yù)處理磷酸化和非磷酸化Cx43蛋白水平及細(xì)胞內(nèi)空間分布的影響，以期初步探討Cx43參與二氮嗪預(yù)處理心肌保護(hù)作用的可能機(jī)制。 方法：建立SD大鼠在體心肌IR模型，82只大鼠隨機(jī)分為

2、5組：假手術(shù)組(Sham組，n=10)、缺血再灌注損傷組(IRI組，n=22)、缺血預(yù)處理組(IP組，n=22)、二氮嗪預(yù)處理組(Dz組，n=22)及二氮嗪預(yù)處理+白屈菜季銨堿組(DZ+CH組，n=6)，大鼠缺血(I)30min后再灌注(R)即刻(R0min)、30min(R<,30min>)、或120(R<,120min>)。以HE染色光鏡分析細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)；全自動生化分析儀檢測CK-MB、LDH；TTC染色測量心肌梗死面積；RT-PC

3、R技術(shù)檢測心肌組織中Cx43mRNA相對表達(dá)量；Western Blot方法檢測細(xì)胞膜總Cx43(TCx43)及非磷酸化Cx43(。NCx43)蛋白的相對表達(dá)量，并計算磷酸化Cx43(PCx43)蛋白的相對表達(dá)量；以免疫熒光化學(xué)激光共聚焦掃描顯微鏡分析Cx43的細(xì)胞內(nèi)空間分布。 結(jié)果：1．與IRI組比較，Dz組及IP組顯著降低心肌梗死面積和心肌酶學(xué)水平(P<0.05)；但Dz組及IP組間無統(tǒng)計學(xué)差異。2.與Sham組比較，IRI

4、組缺血區(qū)再灌注即刻Cx43mRNA表達(dá)水平明顯下降，隨再灌注時間延長，下降越明顯(P<0.05)；IP組及Dz組缺血區(qū)Cx43mRNA水平于R<,0min>時均明顯下降(P<0.05)，隨R時間延長，Cx43mRNA水平均增高(P>0.05)，各時間點缺血區(qū)Cx43mRNA水平在IP組及Dz組之間均無明顯差異(P>0.05)。3.與Sham組比較，IRI組缺血區(qū)R<,0min>TCx43和PCx43表達(dá)顯著降低(P<0.05)，NCx4

5、3表達(dá)顯著升高(P<0.05)，而IP組及Dz組缺血區(qū)R<,0min>TCx43、PCx43及NCx43表達(dá)無明顯變化(P>0.05)；與IRI組比較，IP組及Dz組缺血區(qū)TCx43、PCx43表達(dá)于Romin、R<,30min>明顯增高(P<0.05)，NCx43表達(dá)顯著降低(P<0.05)。4．與Sham組比較，R<,0min>時IRI組缺血區(qū)細(xì)胞膜TCx43熒光強度顯著下降、NCx43熒光強度顯著增加，IP組及Dz組則無明顯改變。

6、IRI組、IP組及Dz組隨R時間延長TCx43熒光逐漸增強，NCx43熒光逐漸減弱。與IRI組比較，IP組及Dz組R<,0min>、R<,30min> TCx43熒光明顯增強、NCx43熒光減弱，R<,120min>無明顯差異。各時間點TCx43及NCx43熒光在IP組及Dz組間無明顯差異。5與DZ組R<,0min>比較，白屈菜季銨堿組缺血區(qū)TCx43蛋白水平明顯下降(P<0.05)，而PCx43、NCx43無明顯變化(P>0.05)。