茵梔黃注射液抗金黃色葡萄球菌作用及機(jī)理研究.pdf

1、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,簡稱SA)是臨床上引起化膿性感染和醫(yī)院內(nèi)感染以及引起食品污染和細(xì)菌性食物中毒的常見的病原菌。獸醫(yī)臨床上常因養(yǎng)殖場飼養(yǎng)密度過大、通風(fēng)不良、衛(wèi)生條件差，地面有碎玻璃、鐵絲等尖銳雜物刺破動(dòng)物皮膚而感染金黃色葡萄球菌，如鴨的蹼或趾被劃傷而感染。此病易傳染，不易治愈，給養(yǎng)殖戶造成極大的經(jīng)濟(jì)損失。為了解決這一問題，不少學(xué)者開展了防治畜禽感染金黃色葡萄球菌的研究工作。目前，國內(nèi)外治療SA的藥

2、物眾多，主要是抗生素治療。由于SA對(duì)抗生素極易產(chǎn)生耐藥性，而且近年來其耐藥周期越來越短，因此金黃色葡萄球菌病已成為臨床治療棘手的難題。 茵梔黃注射液是由茵陳、梔子、金銀花中藥復(fù)方提取物及黃芩甙組成的制劑，具有清熱、解毒、利濕、退黃等藥理作用，臨床上常用于治療肝膽濕熱、惡心嘔吐、小便黃赤、急慢性肝炎等病癥。國內(nèi)外研究表明，茵梔黃注射液中的有效成分，如茵陳揮發(fā)油、梔子甙、氯原酸、黃芩甙等均有較好的抗SA的作用。本課題在總結(jié)國內(nèi)外有關(guān)

3、中藥防治金黃色葡萄球菌引起疾病方面的研究資料的基礎(chǔ)上，以茵梔黃注射液為研究對(duì)象，研究藥物抗SA的作用機(jī)理，以便為尋找天然抑菌劑提供理論依據(jù)。 第一，利用杯管法測定不同濃度的受試藥物對(duì)SA的抑菌圈大小，采用二倍稀釋法測定最低抑菌濃度值(MIC)，求出MPC/MIC值。結(jié)果：茵梔黃注射液對(duì)SA的抑菌圈達(dá)20.50mm，接近陽性對(duì)照組(2.5％慶大霉素對(duì)SA的抑菌圈為23.40mm)，藥液稀釋2000倍仍能抑制細(xì)菌生長。就MPC/MI

4、C值而言，茵梔黃注射液對(duì)SA的MPC/MIC值最低，比值為4，遠(yuǎn)低于青霉素鉀、氟苯尼考注射液等其他抗菌藥物。 第二，40只鴨隨機(jī)分組、攻毒，復(fù)制鴨金黃色葡萄球菌病理模型，用茵梔黃注射液及氟苯尼考注射液對(duì)照治療，觀察藥物對(duì)鴨金黃色葡萄球菌病的治療效果。 結(jié)果：攻毒組的凝血時(shí)間與其他三個(gè)組相比差異極顯著(P<0.01)。茵梔黃組與生理鹽水組相比差異不顯著(P>0.05)。攻毒組及氟苯尼考組的病死率與生理鹽水組相比差異極顯著(

5、P<0.01)，而茵梔黃組與生理鹽水組相比差異不顯著(P>0.05)。從相對(duì)增重率來看，各組差異不顯著(P>0.05)，但茵梔黃組15d增重最接近生理鹽水組。兩個(gè)用藥組之間及分別與生理鹽水組相比脾系數(shù)差異均不顯著(P>0.05)，各組的法氏囊系數(shù)差異不顯著(P>0.05)。第三，采用玻片法和試管法檢測藥物對(duì)血漿凝固酶活性的影響，甲苯胺藍(lán)核酸瓊脂法測定藥物對(duì)耐熱核酸酶(TNase)活性的抑制作用。根據(jù)已公布的金黃色葡萄球菌耐熱核酸酶nuc

6、基因的序列，設(shè)計(jì)并合成一對(duì)特異性的引物，以茵梔黃注射液作用的細(xì)菌基因組DNA為模板，利用PCRi技術(shù)對(duì)其耐熱核酸酶nuc基因片段進(jìn)行擴(kuò)增，獲得了預(yù)計(jì)大小的片段。瓊脂糖凝膠電泳分析，與標(biāo)準(zhǔn)菌株的nuc基因?qū)Ρ确治?。結(jié)果：茵梔黃注射液在1∶1～1∶128濃度范圍內(nèi)對(duì)SA的結(jié)合凝固酶和游離凝固酶活性無影響。茵梔黃注射液1∶1～1∶8濃度范圍內(nèi)可完全抑制SA的耐熱核酸酶活性，即使稀釋512倍仍對(duì)耐熱核酸酶活性有抑制作用，其各濃度抑制率與空白組相