吳茱萸次堿改善LPC誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞縫隙連接細(xì)胞間通訊功能障礙.pdf

1、目的:縫隙連接(GJ)是由相鄰細(xì)胞膜上的連接蛋白(Cxs)構(gòu)成的親水性通道，介導(dǎo)相鄰細(xì)胞間物質(zhì)和能量信息的傳遞，即縫隙連接細(xì)胞間通訊(GJIC)。大量研究表明，血管壁Cxs的類型、數(shù)目和空間分布的改變所致的細(xì)胞間通訊功能障礙是AS血管病變發(fā)生發(fā)展的重要機(jī)制。吳茱萸次堿(Rut)是中藥吳茱萸的有效成分，具有廣泛的心血管效應(yīng)。血管內(nèi)皮損傷是動脈粥樣硬化(AS)發(fā)生的始動環(huán)節(jié)，保護(hù)血管內(nèi)皮是抗AS血管病變的重要策略。我室前期實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，Ru

2、t可抑制LPC（Ox-LDL的主要活性成分）誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，其機(jī)制與激活辣椒素受體(TRPV1)，促進(jìn)降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)的釋放和表達(dá)有關(guān)。AS時炎癥及氧化應(yīng)激均可改變Cxs的水平，基于CGRP是一種重要的炎癥調(diào)節(jié)因子，本研究擬進(jìn)一步研究Rut對抗AS作用的Cx37和40及內(nèi)皮GJIC功能的影響，確定TRPV1/CGRP途徑是否通過影響縫隙連接細(xì)胞間通訊功能而發(fā)揮作用。
　　方法:在LPC誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型，預(yù)先加

3、入不同濃度的Rut(10-6mol/L，3×10-6mol/L，10-5 mol/L)處理10min后加入LPC(10mg/L)共同孵育24h。檢測內(nèi)皮細(xì)胞活力（MTT法）和細(xì)胞培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(LDH)、ROS（流式）及單核內(nèi)皮細(xì)胞粘附率以評價內(nèi)皮細(xì)胞損傷程度。為了探討Rut對內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用是否涉及TRPV1途徑，應(yīng)用TRPV1拮抗劑Capsazepine（10-5M）進(jìn)行分析，同時熒光定量PCR檢測CGRP、Cx37、Cx40

4、的mRNA水平，Western blot檢測Cx37，Cx40的蛋白表達(dá)水平，Lucifer Yellow（熒光黃）劃痕負(fù)載試驗(yàn)測定縫隙連接細(xì)胞通訊功能。
　　結(jié)果:LPC孵育內(nèi)皮細(xì)胞后，細(xì)胞活力顯著降低，LDH、ROS水平和內(nèi)皮單核細(xì)胞粘附率顯著升高，Cx37，Cx40的mRNA和蛋白表達(dá)降低，縫隙連接染料遷移距離減少。而Rut可增加細(xì)胞活力，抑制LPC誘導(dǎo)的ROS水平的增加和內(nèi)皮單核細(xì)胞粘附，同時上調(diào)Cx37，Cx40的mRN