加味青蒿鱉甲湯對ANLL-CR患者BMNC來源DC誘導(dǎo)作用研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的: 急性白血病是嚴(yán)重威脅患者生命的惡性血液病,隨著現(xiàn)代化療方法的發(fā)展、新的化療藥物的開發(fā)以及造血干細(xì)胞移植的發(fā)展,其緩解率有了很大的提高,有的病例已治愈,但是許多患者仍不免復(fù)發(fā)而危及生命。白血病復(fù)發(fā)的根本原因是緩解后患者體內(nèi)仍存在微量白血病細(xì)胞,而機(jī)體不能對殘留白血病細(xì)胞進(jìn)行免疫監(jiān)視而清除之。提高患者生存時(shí)間甚至治愈白血病,緩解期的治療顯得尤為重要,殘留白血病細(xì)胞的清除成為重點(diǎn),這也是目前研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)之一。然而,目前尚缺乏緩解后

2、白血病即微小殘留白血病(Minimal Residu-al Disease in Leukemia,MRD-L)的有效治療方法,從中醫(yī)角度探討其治療方法無疑有著重要意義。 方法: 用加味青蒿鱉甲湯灌胃動(dòng)物(大白兔)制備中藥含藥血清備用。將達(dá)到完全緩解標(biāo)準(zhǔn)的急性白血病患者骨髓經(jīng)抗凝后,應(yīng)用綿羊紅細(xì)胞玫瑰花結(jié)程序從骨髓中分離出去T細(xì)胞的骨髓單個(gè)核細(xì)胞(TD-BMNC),以加味青蒿鱉甲湯含藥血清與細(xì)胞因子聯(lián)合培養(yǎng),觀察含藥血清對ANL

3、L-CR患者TD-BMNC來源的樹突狀細(xì)胞分化成熟情況的影響。用此法誘導(dǎo)分化的樹突狀細(xì)胞與純化的正常人或緩解期患者外周血T細(xì)胞共同培養(yǎng),觀察對T細(xì)胞增殖能力的影響。用激發(fā)的T細(xì)胞與K562細(xì)胞共同培育,以MTT法測定該T細(xì)胞對K562細(xì)胞的殺傷活性。 結(jié)果: 1.DC的形態(tài) 倒置顯微鏡下:培養(yǎng)第4d可見細(xì)胞成簇生長,由圓形變?yōu)椴灰?guī)則形。培養(yǎng)第7d, 長出小刺狀結(jié)構(gòu),細(xì)胞質(zhì)變豐富,并長出樹突樣偽足,培養(yǎng)第9天樹突樣結(jié)構(gòu)更加明顯,細(xì)

4、胞質(zhì)更加豐富。 2.DC的抗原表達(dá) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在這三種培養(yǎng)體系中,ANLL-CR患者去T細(xì)胞的骨髓MNC(TD-BMNC)均能分化為形態(tài)特征典型的DC,能表達(dá)成熟DC的特異性標(biāo)記(CD-86和CD-1a),高表達(dá)HLA-DR。大、中、小劑量加味青蒿鱉甲湯合細(xì)胞因子組的CD-1a表達(dá)與細(xì)胞因子組比較有顯著差異;大劑量加味青蒿鱉甲湯合細(xì)胞因子組、大劑量加味青蒿鱉甲湯組的CD-86表達(dá)與細(xì)胞因子組比較有顯著差異;大劑量加味青蒿鱉甲

5、湯合細(xì)胞因子組的HLA-DR與大劑量加味青蒿鱉甲湯組、細(xì)胞因子組比較有顯著差異; 3.DC激活T細(xì)胞對K562細(xì)胞的殺傷率 效靶比10:1時(shí),大劑量加味青蒿鱉甲湯合細(xì)胞因子組(患者T細(xì)胞組)、大劑量加味青蒿鱉甲湯組(患者T細(xì)胞組)與細(xì)胞因子組(患者T細(xì)胞組)比較有顯著差異;大劑量加味青蒿鱉甲湯合細(xì)胞因子組(正常人T細(xì)胞組)與大劑量加味青蒿鱉甲湯組(正常人T細(xì)胞組)、細(xì)胞因子組(正常人T細(xì)胞組)比較有顯著差異;效靶比20:1時(shí),

6、大劑量加味青蒿鱉甲湯合細(xì)胞因子組(患者T細(xì)胞組)、中劑量加味青蒿鱉甲湯合細(xì)胞因子組(患者T細(xì)胞組)與細(xì)胞因子組(患者T細(xì)胞組)比較有顯著差異;中劑量加味青蒿鱉甲湯合細(xì)胞因子組(患者T細(xì)胞組)與中劑量加味青蒿鱉甲湯組(患者T細(xì)胞組)比較有顯著差異;效靶比40:1時(shí),中劑量加味青蒿鱉甲湯合細(xì)胞因子組(患者T細(xì)胞組)與細(xì)胞因子組(患者T細(xì)胞組)比較,有顯著差異。含藥血清組內(nèi)大中小劑量組之間比較無顯著差異。各效靶比時(shí),加味青蒿鱉甲湯合細(xì)胞因子組

7、(正常人T細(xì)胞組)與加味青蒿鱉甲湯合細(xì)胞因子組(患者T細(xì)胞組)比較無顯著差異,加味青蒿鱉甲湯組(正常人T細(xì)胞組)與加味青蒿鱉甲湯組(患者T細(xì)胞組)比較無顯著差異。同組不同效靶比之間無顯著差異。 結(jié)論: 在DC的誘導(dǎo)過程中,細(xì)胞體積逐漸增大、聚集成集落,顯示細(xì)胞的增殖,同時(shí)細(xì)胞胞體出現(xiàn)明顯的樹突狀突起,細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則,胞質(zhì)豐富,并有成簇現(xiàn)象,顯示出DC的形態(tài)學(xué)特征。DC的免疫分子檢測顯示,在實(shí)驗(yàn)的三種培養(yǎng)體系中, ANLL-CR

8、患者去T細(xì)胞的骨髓MNC(TD-BMNC)均能分化為形態(tài)特征典型的DC,能表達(dá)成熟DC的特異性標(biāo)記(CD-86和CD-1a),高表達(dá)HLA-DR。 加味青蒿鱉甲湯含藥血清有助于ANLL-CR患者TD-BMNC來源DC的誘導(dǎo)。加味青蒿鱉甲湯含藥血清聯(lián)合細(xì)胞因子、單純的加味青蒿鱉甲湯含藥血清、單純細(xì)胞因子誘導(dǎo)的DC激活的T細(xì)胞對K562細(xì)胞均有殺傷作用,以加味青蒿鱉甲湯含藥血清聯(lián)合細(xì)胞因子組為優(yōu)。其機(jī)理可能是含藥血清聯(lián)合細(xì)胞因子在誘

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