獼猴桃AcGLK2基因過(guò)表達(dá)載體的構(gòu)建及在番茄中的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、番茄紅素和β-胡蘿卜素是人體必需的營(yíng)養(yǎng)元素,但是人類無(wú)法通過(guò)自身代謝合成,主要從食物中攝取。成熟的番茄中含有的主要色素是番茄紅素和β-胡蘿卜素。因此,人體攝取番茄紅素和β-胡蘿卜素的主要來(lái)源之一就是番茄。番茄紅素和β-胡蘿卜素都是具有很強(qiáng)活性的氧化劑,可以幫助人體清除體內(nèi)的自由基,從而延緩人體衰老,也可以提高人體免疫力。有研究表明,SlGLK2(Solanum Lycopersicum GOLDEN2- LIKE)基因可以提高番茄果實(shí)中

2、的番茄紅素和β-胡蘿卜素含量,同時(shí)可以增加果實(shí)中碳水化合物的含量。
　　本實(shí)驗(yàn)獲得了獼猴桃基因 AcGLK2的兩個(gè)可變剪接轉(zhuǎn)錄本,分別命名為AcGLK2a和AcGLK2b。構(gòu)建了pBTEX-AcGLK2a-Flag(Actinidia Lindl GOLDEN2-LIKE), pBTEX-AcGLK2a-Flag(Actinidia Lindl GOLDEN2-LIKE)兩個(gè)煙草瞬時(shí)表達(dá)載體,將帶有載體的農(nóng)桿菌注射煙草葉片,使用W

3、estern-Blot檢測(cè)AcGLK2a、AcGLK2b蛋白在煙草中表達(dá)的情況,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,AcGLK2a、AcGLK2b基因均能表達(dá)40KD左右大小的蛋白。
　　構(gòu)建獼猴桃 AcGLK2a基因過(guò)表達(dá)載體,轉(zhuǎn)入番茄植株中,對(duì)轉(zhuǎn)基因番茄果實(shí)進(jìn)行初步分析,可為采用基因工程方法轉(zhuǎn)入外源基因?qū)Ω牧挤压麑?shí)品質(zhì)做新的嘗試。提取獼猴桃 RNA基因,進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄得到獼猴桃 cDNA, PCR獲得獼猴桃AcGLK2a、AcGLK2b基因。將獼猴桃

4、AcGLK2a、AcGLK2b基因序列分別導(dǎo)入帶有35S啟動(dòng)子的植物表達(dá)載體 pBI121上。將所構(gòu)建的的pBTEX-AcGLK2a-Flag和pBTEX-AcGLK2a-Flag表達(dá)載體,采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方式轉(zhuǎn)入番茄植株中,得到AcGLK2a轉(zhuǎn)基因番茄苗并做陽(yáng)性鑒定,沒(méi)有得到AcGLK2b轉(zhuǎn)基因番茄苗。半定量分析轉(zhuǎn)基因番茄和野生番茄的AcGLK2a的表達(dá)量,并測(cè)量轉(zhuǎn)基因番茄和野生番茄的果實(shí)中的葉綠素和番茄紅素的含量,同時(shí)測(cè)定轉(zhuǎn)基因番茄