果園綠肥草木樨耐鹽篩選、再生和HS轉(zhuǎn)化因子轉(zhuǎn)化.pdf

1、在天津市20萬hm2果園中，有1/4果園屬于鹽堿地，該果園中果實(shí)品質(zhì)差、產(chǎn)量低，果樹易早衰，經(jīng)濟(jì)效益低。所以，改良鹽堿果園土壤理化性質(zhì)，改善其土壤結(jié)構(gòu)，是鹽堿果園迫切需解決的問題。 許多果園綠肥作物具有較強(qiáng)的耐鹽能力，種植綠肥改變可以改良土壤，如田菁(Sesbaniarostrata)、草木樨(Melilotussuavena)、檉麻(CritalariajumceaL.)等，它們一方面可以提高土壤肥力，另一方面可以降低土壤含鹽

2、量和土壤pH。 草木樨(M.suavena)作為一種優(yōu)良的果園綠肥，有著較為廣泛的用途，屬于鹽生植物，有較強(qiáng)的抗逆性和適應(yīng)性。它具有固氮作用，還是優(yōu)良的牧草。 但是草木樨也只能耐0.6％的土壤含鹽量，只能在中度鹽堿地上生長(zhǎng)，所以進(jìn)行耐鹽脅迫試驗(yàn)的鹽脅迫濃度為0.8％。另外草木樨的出苗率和苗木的耐鹽性較差[2]。因此，提高草木樨的耐鹽性、選育優(yōu)良的耐鹽堿草木樨品種是鹽堿果園土壤改良，特別是中、重度鹽堿果園的關(guān)鍵。

3、本研究首先收集了7個(gè)不同地域的耐鹽草木樨：寧夏草木樨，赤峰草木樨，黑龍江草木樨，西寧草木樨1,西寧草木樨2，西寧草木樨3，天津草木樨。分別進(jìn)行無菌培養(yǎng)和耐鹽脅迫試驗(yàn)和耐鹽篩選，通過鹽脅迫下的生理反應(yīng)——生理指標(biāo)的測(cè)定(細(xì)胞膜透性、脯氨酸、丙二醛、株高、鮮重、干重)和耐鹽性綜合分析，得出天津草木樨、西寧草木樨1、赤峰草木樨為耐鹽最強(qiáng)的品種或類型。由于赤峰草木樨種子萌芽率高、變異小，被選擇為基因轉(zhuǎn)化的外植體。通過不同激素、除草劑、不同外植體

4、器官的篩選建立了再生體系和遺傳轉(zhuǎn)化體系，獲得了耐鹽轉(zhuǎn)基因草木樨植株。主要內(nèi)容如下： 1.在0.8％鹽脅迫下，對(duì)所試草木樨葉片細(xì)胞質(zhì)膜透性分析，表明寧夏草木樨葉片細(xì)胞質(zhì)膜透性最高，其余依次是寧夏草木樨＞寧草木樨3＞寧草木樨2＞龍江草木樨＞寧草木樨1＞峰草木樨＞天津草木樨；在0.8％鹽脅迫下，對(duì)所試草木樨游離脯氨酸含量分析，表明西寧草木樨1葉片游離脯氨酸含量最高，其余依次是赤峰草木樨＞天津草木樨＞西寧草木樨3＞寧夏草木樨＞西寧草木樨

5、2＞黑龍江草木樨；在0.8％鹽脅迫下，對(duì)所試草木樨葉片丙二醛含量分析，表明赤峰草木樨葉片丙二醛含量最高，其余依次是天津草木樨＞西寧草木樨2＞西寧草木樨3＞寧夏草木樨＞黑龍江草木樨＞寧夏草木樨；在0.8％鹽脅迫下，對(duì)所試草木樨株高分析，表明天津草木樨株高最高，其余依次是西寧草木樨1＞西寧草木樨3＞赤峰草木樨＞寧夏草木樨＞西寧草木樨2＞黑龍江草木樨；在0.8％鹽脅迫下，對(duì)所試草木樨鮮重分析表明，西寧草木樨1鮮重最重，其余依次是赤峰草木樨＞天

6、津草木樨＞西寧草木樨3＞寧夏草木樨＞西寧草木樨2＞黑龍江草木樨；0.8％鹽脅迫下，對(duì)所試草木樨干重分析表明，天津草木樨干重最重，其余依次是西寧草木樨1＞赤峰草木樨＞西寧草木樨3＞寧夏草木樨＞西寧草木樨2＞黑龍江草木樨。 經(jīng)過對(duì)不同草木樨品種的細(xì)胞膜透性、脯氨酸含量、丙二醛含量、株高、鮮重和干重的六個(gè)生理指標(biāo)的測(cè)定和篩選，及指標(biāo)的綜合評(píng)價(jià)分析，得出天津草木樨、西寧草木樨1、赤峰草木樨為1級(jí)，耐鹽性最強(qiáng)；其次是西寧草木樨3為2級(jí)，耐

7、鹽性較強(qiáng)；寧夏草木樨、西寧草木樨2的耐鹽性為3級(jí)，耐鹽性較差；黑龍江草木樨耐鹽性為4級(jí)，耐鹽性最差。 所有指標(biāo)表明天津草木樨、赤峰草木樨、西寧草木樨1的抗鹽堿能力最強(qiáng)，可以作為耐鹽基因的轉(zhuǎn)化受體的首選材料。 2.赤峰草木樨的最優(yōu)再生體系為：外植體為下胚軸，誘導(dǎo)再生芽培養(yǎng)基配方為：MS+4mg/LBA+0.2mg/LIAA上；伸長(zhǎng)培養(yǎng)基配方為：MS+1mg/LBA+0.2mg/LIAA；生根培養(yǎng)基配方為：1/2MS+0.2