PCR在犬常見(jiàn)傳染性疾病診斷中的應(yīng)用研究.pdf

1、PCR是20世紀(jì)80年代發(fā)展起來(lái)的體外酶促擴(kuò)增特定DNA片段的技術(shù)。它具有特異、敏感、快速、簡(jiǎn)單的優(yōu)點(diǎn)，能在實(shí)驗(yàn)室條件將特定DNA片段于數(shù)小時(shí)內(nèi)擴(kuò)增10<'5>～10<'9>倍，產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳，可見(jiàn)到預(yù)期大小的DNA條帶出現(xiàn)，從而可對(duì)疾病病原體的基因組片段作出鑒定。本文主要研究PCR技術(shù)在犬瘟熱、犬細(xì)小病毒感染、犬腺病毒感染、犬巴貝斯蟲(chóng)病病原體診斷中的應(yīng)用。 根據(jù)GenBank上發(fā)表的病原體基因組序列，在保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性

2、引物，應(yīng)用RT-PCR或PCR方法從病料總RNA或DNA中擴(kuò)增出病原體特異的基因組片段，通過(guò)瓊脂糖電泳或聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定PCR產(chǎn)物，然后采用半嵌套式PCR，限制性?xún)?nèi)切酶酶切或序列分析對(duì)PCR產(chǎn)物作進(jìn)一步的分析鑒定，最終對(duì)疾病作出確切診斷。 本文在對(duì)犬瘟熱疾病診斷中采用半嵌套式RT-PCR方法，設(shè)計(jì)特異性引物，首輪PCR擴(kuò)增586bp的基因片段，第二輪PCR擴(kuò)增476bp的基因片段。結(jié)果在29份臨床病料中檢出19分陽(yáng)性；在對(duì)

3、犬細(xì)小病毒病的診斷中采用PCR和序列分析的方法，設(shè)計(jì)特異性引物擴(kuò)增犬細(xì)小病毒448bp的基因片段，隨后對(duì)448bp的基因片段進(jìn)行序列分析。結(jié)果在38份臨床病料中檢出27份陽(yáng)性；在對(duì)犬腺病毒感染和犬巴貝斯蟲(chóng)病的診斷中均采用PCR-RFLP方法和序列分析的方法，設(shè)計(jì)2對(duì)特異性引物同時(shí)對(duì)病料中的DNA進(jìn)行擴(kuò)增，然后對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行RFLP分析和序列分析。結(jié)果分別在59份和26份臨床病料中檢出5份和3份陽(yáng)性，且腺病毒陽(yáng)性病例病原均為犬傳染性肝炎