DKK1在膠質(zhì)瘤中的表達分析及其與腫瘤惡性程度相關(guān)性的研究.pdf

1、目的： 分別從蛋白和基因水平，檢測DKK1在膠質(zhì)瘤細胞株/系、腫瘤患者組織、血清和腦脊液中的表達情況；分析DKK1表達程度與膠質(zhì)瘤級別的相關(guān)性。 方法： 細胞株/系：選用12株膠質(zhì)母細胞瘤細胞株/系(U251、SF767、SF295、T98G、MGR1、MGR2、MGR3、SKMG1、SKMG4、UWR7、UW28、SKI-N2)、髓母細胞瘤細胞株D341和星形細胞瘤2級細胞系SHG44共14株膠質(zhì)瘤細胞株/系，

2、人腦星形膠質(zhì)細胞作為正常對照組。ELISA雙抗體夾心法檢測上述各細胞培養(yǎng)上清液和細胞裂解液中DKK1蛋白含量；半定量RT-PCR檢測上述各細胞中DKK1mRNA表達情況，t檢驗分析膠質(zhì)瘤細胞組和正常對照組之間DKK1表達差異； 腫瘤組織：收集膠質(zhì)瘤患者腫瘤組織，以腦外傷內(nèi)減壓切除組織為對照組，制成石蠟包埋組織和新鮮冰凍組織。采用免疫組織化學(xué)方法檢測石蠟包埋組織中DKK1蛋白含量，CMH卡方檢驗比較DKK1在膠質(zhì)瘤組與正常對照組之

3、間的表達差異，Kendall'tau-c相關(guān)性分析法檢驗DKK1表達與膠質(zhì)瘤級別的相關(guān)性；半定量RT-PCR檢測上述組織標本中DKK1mRNA表達情況，t檢驗分析膠質(zhì)瘤組和正常對照組之間DKK1表達差異； 腦脊液和血清：收集膠質(zhì)瘤患者，神經(jīng)系統(tǒng)良性腫瘤患者(垂體瘤，腦膜瘤，神經(jīng)鞘瘤，聽神經(jīng)瘤等)的腦脊液和血清，以腦外傷患者的腦脊液和血清為對照組。ELISA雙抗體夾心法檢測各組腦脊液和血清中DKK1蛋白表達情況，t檢驗分析各組間D

4、KK1表達差異。 結(jié)果： 1.ELISA檢測細胞培養(yǎng)上清液和細胞裂解液結(jié)果： ①12株高級別膠質(zhì)瘤細胞株/系均有不同程度DKK1蛋白表達，低級別膠質(zhì)瘤細胞系SHG44、髓母細胞瘤細胞株D341均未見表達；對照組人腦星形膠質(zhì)細胞和各細胞培養(yǎng)液中亦未見DKK1蛋白表達。高級別膠質(zhì)瘤細胞組中與低級別膠質(zhì)瘤細胞、正常對照組之間DKK1蛋白表達差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，低級別膠質(zhì)瘤細胞與正常對照組均無DKK1蛋白表

5、達，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)； ②高級別膠質(zhì)瘤細胞株/系組中，培養(yǎng)上清液中DKK1蛋白含量明顯高于細胞裂解液中DKK1蛋白含量，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。 2.ELISA檢測腦脊液和血清中DKK1蛋白表達結(jié)果： ①腦脊液中，膠質(zhì)瘤組DKK1含量顯著高于神經(jīng)系統(tǒng)良性腫瘤組及正常對照組；神經(jīng)系統(tǒng)良性腫瘤組與正常對照組間無明顯差異； ②血清中，膠質(zhì)瘤組，神經(jīng)系統(tǒng)良性腫瘤組及正常對照組之間DKK1

6、含量均未見顯著性差異。 3.免疫組織化學(xué)檢測石蠟包埋腫瘤組織中DKK1蛋白表達結(jié)果①DKK1在膠質(zhì)瘤組織中的陽性表達率為(91.5％，43/47)，在正常腦組織中陽性表達率為(18.1％，2/11)；膠質(zhì)瘤組織中DKK1陽性表達水平高于正常腦組織； ②DKK1在膠質(zhì)瘤組織中的表達與腫瘤病理分級呈正相關(guān)。 4.RT-PCR檢測DKK1mRNA表達結(jié)果： ①12株膠質(zhì)母細胞瘤細胞株/系的DKK1基因擴增產(chǎn)物均

7、有一條230bp左右亮度不一的特異性條帶；低級別膠質(zhì)瘤細胞系SHG44、髓母細胞瘤細胞株D341和正常對照組人腦星形膠質(zhì)細胞均未見特異性條帶； ②膠質(zhì)瘤組織中灰度值高于正常組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)。 結(jié)論： 1.DKK1在膠質(zhì)瘤中的表達顯著高于在正常人腦中的表達： 2.在膠質(zhì)瘤中，隨著腫瘤級別的增高DKK1的表達程度亦增高； 3.膠質(zhì)瘤腦脊液中DKK1含量顯著高于神經(jīng)系統(tǒng)良性腫瘤組及