兔Epi-LASIK術(shù)后早期角膜創(chuàng)傷愈合反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究兔Epi-LASIK術(shù)后上皮瓣細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)、活性變化及其對(duì)早期角膜修復(fù)反應(yīng)的影響，來(lái)探討Epi-LASIK術(shù)后創(chuàng)傷愈合反應(yīng)的特點(diǎn)。 本研究分為二部分 實(shí)驗(yàn)一 兔Epi-LASIK術(shù)后上皮瓣細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)和活性的變化 實(shí)驗(yàn)二 兔Epi-LASIK術(shù)后上皮瓣保留對(duì)早期角膜創(chuàng)傷修復(fù)反應(yīng)的影響 方法 實(shí)驗(yàn)一建立兔Epi-LASIK模型，隨機(jī)分為1d、3d、5d、7d四組，并設(shè)立空白

2、對(duì)照組。采用光鏡、透射電子顯微鏡觀察上皮瓣細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)變化；冰凍切片行酶組織化學(xué)檢測(cè)上皮細(xì)胞(包括上皮瓣和周邊上皮)三磷酸腺苷酶、葡萄糖-6-磷酸酶活性的變化；石蠟切片行凋亡(上皮瓣)及增殖細(xì)胞核抗原免疫組織化學(xué)(周邊上皮)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)二通過(guò)建立兔Epi-LASIK、PRK模型對(duì)比研究，隨機(jī)分為1d、3d、5d、7d四組，并設(shè)立空白對(duì)照組。觀察兩種手術(shù)術(shù)后切削區(qū)域角膜基質(zhì)細(xì)胞凋亡情況、角膜基質(zhì)細(xì)胞數(shù)量、角膜基質(zhì)炎癥細(xì)胞數(shù)量、白細(xì)胞介素1(I

3、L-1β)和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF-β<,2>)表達(dá)情況。 結(jié)果 實(shí)驗(yàn)一 (1)形態(tài)學(xué)觀察：KM5000D型角膜上皮刀分離的上皮瓣基底膜完整，細(xì)胞之間連接緊密，7d時(shí)各層細(xì)胞基本保持正常的形態(tài)結(jié)構(gòu)，上皮與基質(zhì)之間結(jié)合緊密。 (2)細(xì)胞酶活性：Epi-LASIK術(shù)后1d、3d、5d、7d上皮瓣細(xì)胞ATP酶、G-6-P酶活性分別為(79％、58％、69％、86％)(79％、63％、77％、97％)。提示：Epi

4、-LASIK術(shù)后上皮瓣細(xì)胞經(jīng)過(guò)了1d具有較高活性、3d下降、5d上升、7d基本恢復(fù)正常的曲線過(guò)程。 (3)增生和凋亡：Epi-LASIK術(shù)后周邊角膜上皮PCNA陽(yáng)性數(shù)與空白對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=1.10，P>0.05)；Epi-LASIK術(shù)后上皮瓣細(xì)胞未見(jiàn)凋亡。提示:Epi-LASIK術(shù)后上皮瓣復(fù)位后未引起上皮瓣細(xì)胞凋亡和周邊角膜上皮細(xì)胞過(guò)度增生，維持了較好的生理狀態(tài)。 實(shí)驗(yàn)二 (1)角膜基質(zhì)細(xì)胞凋亡：

5、Epi-LASIK、PRK術(shù)后1d角膜基質(zhì)細(xì)胞凋亡數(shù)目比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-0.33，P>0.05)；Epi-LASIK術(shù)后3d、5d、7d比PRK術(shù)后同時(shí)間段凋亡數(shù)目少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-7.05、t=-5.93、t=-0.33，均P<0.01)。提示:Epi-LASIK術(shù)后引起角膜基質(zhì)細(xì)胞凋亡數(shù)量較少、程度較輕。 (2)角膜基質(zhì)炎癥細(xì)胞數(shù)量： Epi-LASIK術(shù)后1d、3d角膜基質(zhì)炎癥細(xì)胞數(shù)量比同時(shí)間段PR

6、K少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(分別為t=12.42，P<0.01；t=4.57，P<0.05)；術(shù)后5d、7d Epi-LASIK、PRK角膜基質(zhì)幾乎未見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。提示：Epi.LASIK術(shù)后炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)到角膜基質(zhì)數(shù)量較少。 (3)角膜基質(zhì)細(xì)胞數(shù)量：術(shù)后1d、3d Epi-LASIK角膜基質(zhì)細(xì)胞數(shù)量分別為18.33±7.03、19.20±3.3個(gè)/400倍視野，與正常角膜基質(zhì)細(xì)胞數(shù)量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.19、-0.2

7、4，均P>0.05)，比同時(shí)間段PRK多，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=59、P<0.05，t=3.32、P<0.01)；術(shù)后5d、7d Epi-LASIK角膜基質(zhì)細(xì)胞數(shù)量增多，分別為33.57±10.03、42.00±9.72個(gè)/400倍視野，比正常角膜基質(zhì)細(xì)胞數(shù)量多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.67、-7.99，均P<0.01)；5d Epi-LASIK與同時(shí)間段PRK比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(r=0.22，均P>0.05)； 7dEpi-LA

8、SIK 比同時(shí)間段PRK數(shù)量多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.35，P<0.01)。提示：Epi-LASIK術(shù)后角膜基質(zhì)細(xì)胞數(shù)量在1d、3d無(wú)明顯變化，在5d、7d出現(xiàn)增多，說(shuō)明Epi-LASIK術(shù)后引起較輕的角膜創(chuàng)傷愈合反應(yīng)，有利于組織的修復(fù)。 (4)術(shù)后7d形態(tài)學(xué)觀察：Epi-LASIK術(shù)后角膜上皮與基質(zhì)結(jié)合緊密，膠原排列規(guī)則，基質(zhì)細(xì)胞呈靜止?fàn)顟B(tài)；PRK術(shù)后角膜上皮與基質(zhì)貼附較好，膠原排列相對(duì)紊亂，基質(zhì)細(xì)胞核漿比例擴(kuò)大，細(xì)胞器豐

9、富，呈增生狀態(tài)。提示：與PRK相比，Epi-LASIK術(shù)后7d角膜上皮與基質(zhì)結(jié)合更緊密，膠原纖維分布更規(guī)則，角膜基質(zhì)細(xì)胞更安靜。 (5)角膜上皮、基質(zhì)TGF-β<,2>、IL-1β表達(dá)角膜上皮TGF-β<,2>、IL-1β表達(dá)情況：3d、5d、7d組Epi-LASIK、PRK角膜上皮表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(TGF-β<,2>：t=0.06、t=-2.0、t=-1.8，均P>0.05；IL-1β：t=0.29、t=-1.29、t=-

10、0.31，均P>0.05)。角膜基質(zhì)TGF-β<,2>、IL-1β表達(dá)：1d、3d組Epi-LASIK比PRK組角膜基質(zhì)表達(dá)明顯弱，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(TGF-β<,2>： t=-8.4、t=-3.1，均<0.05；IL-1β：t=-2.3、t=-2.7，均P<0.05)；5d、7d組Epi-LASIK、PRK表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(TGF-β<,2>：t=-1.9、t=-2.0，均P>0.05；IL-1β：t=1.8、t=-0.6，均P>

11、0.05)提示：與PRK比較：Epi-LASIK術(shù)后TGF-β<,2>、IL-1β在角膜上皮表達(dá)無(wú)差異，在角膜基質(zhì)表達(dá)明顯減弱，其機(jī)制可能主要是上皮瓣基底膜的完整起到了物理屏障作用。 結(jié)論 1、KM5000D型角膜上皮刀分離的上皮瓣基底膜完整，細(xì)胞之間連接緊密。 2、Epi-LASIK手術(shù)制作了較高活性角膜上皮瓣，保持了較好的形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能，最大限度的符合角膜上皮自然的生理狀態(tài)。 3、Epi-LASIK術(shù)