轉染PCNA多肽表位融合IL-18基因的樹突狀細胞刺激T細胞對結腸癌細胞凋亡的影響.pdf

1、目的：研究轉染增殖細胞核抗原(PCNA)肽表位融合白介素18(IL-18)基因的樹突狀細胞(DCs)刺激T淋巴細胞后對結腸癌細胞凋亡的影響。
　　方法：采用密度梯度離心法分離獲取人外周血單個核細胞(PBMC)，分離培養(yǎng)人樹突狀細胞(Dendritic cells，DCs)和T淋巴細胞，運用流式細胞儀測定未成熟DC的CD40及成熟DC的CD83。通過非脂質體聚合物MegaTran1.0分別將帶有熒光標記的空質粒(pIRES-EGFP

2、)，PCNA肽表位質粒(pIRES-EGFP-PCNA(6))和PCNA肽表位融合IL-18基因質粒(pIRES-EGFP-PCNA(6)/IL-18)轉染到DCs內(nèi)。通過熒光情況鑒定轉染效率。根據(jù)本課題既往試驗結果，三組按照DCs：T淋巴細胞1:10的比例與T淋巴細胞共同培養(yǎng)，并設置空白對照組。選用T淋巴細胞與結腸癌細胞濃度比為5:1，10:1，20:1，40:1四個濃度梯度，取共培養(yǎng)后的上清液與結腸癌細胞共培養(yǎng)。采用流式細胞儀測定結

3、腸癌細胞的凋亡。
　　結果：人PBMC可以成功誘導出DC，流式細胞儀顯示人DC高表達CD40(72％)，成熟DC較高表達CD83(75％)。MegaTran1.0能較好的將質粒轉染至未成熟的DCs內(nèi)。各組DCs刺激T淋巴細胞后均能誘導結腸癌SW620細胞的凋亡。在相同T淋巴細胞與結腸癌SW620細胞的濃度比下，轉染pIRES-EGFP-PCNA(6)/IL-18的DCs刺激T細胞后的上清液對結腸癌細胞SW620的凋亡最明顯。優(yōu)于對

4、照組、空載體組和pIRES-EGFP-PCNA(6)組。PCNA肽表位基因轉染組與空白對照DCs組、空質粒組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，空白對照組與空質粒組比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。且各組內(nèi)，隨著濃度比的增加，結腸癌SW620細胞凋亡越明顯。
　　結論：轉染pIRES-EGFP-PcNA(6)/IL-18的DCs刺激T淋巴細胞后的上清液對結腸癌SW620細胞的凋亡作用最強。T淋巴細胞與結腸癌細胞效靶比濃度越高，