瘦素及其受體在糖尿病慢性皮膚潰瘍組織中表達及臨床意義的研究.pdf

1、【背景】 自發(fā)性潰瘍及創(chuàng)面形成后難愈合是臨床上常見的糖尿病(DM)慢性并發(fā)癥，發(fā)生在下肢的慢性潰瘍還可導致截肢，給患者造成巨大的精神壓力、嚴重影響生活質量，同時也造成沉重的社會經濟負擔。據(jù)統(tǒng)計，糖尿病患者的下肢皮肽潰瘍發(fā)生率約100倍于非糖尿病患者，其下肢截肢的危險性為非糖尿病人的15倍。隨著近年來糖尿病發(fā)病率的迅速上升，這一并發(fā)癥已呈現(xiàn)明顯增多趨勢。深入研究糖尿病慢性皮膚潰瘍形成機制，尋找新的預防和治療方法已是當今的一項重要課題。

2、 與皮膚組織緊密相連的脂肪組織作為一個重要的內分泌器官，其產生的多種脂肪因子都參與了糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)生，如：脂聯(lián)素、抵抗素、瘦素(Leptin)、腫瘤壞死因子α(TNFα)、白細胞介素6(IL-6)和PPAR-γ調節(jié)的血管生成因子PGAR等。創(chuàng)傷修復領域的研究發(fā)現(xiàn)：這些脂肪因子在發(fā)育學、信號轉導、干細胞作用、組織修復等多方面還與皮膚組織存在著密切聯(lián)系。胰島素樣生長因子(IGF)、轉化生長因子β(TGF-β)、血管內皮細胞生長因子

3、(VEGF)等脂肪細胞分泌的生長因子均是參與創(chuàng)面愈合、介導炎性反應和肉芽組織形成的重要生長因子。此外，脂肪細胞分泌的纖溶酶原激活物的抑制劑、血管緊張素、性激素類、與脂質蛋白代謝相關的脂蛋白脂酶、游離脂肪酸以及視黃醛結合蛋白質等，均在不同層面和/或以不同方式與組織修復發(fā)生關聯(lián)。瘦素(Leptinl是由OB基因編碼、脂肪組織分泌的一種多肽類激素。最初發(fā)現(xiàn)它具有食欲控制和能量消耗的作用，通過對糖、脂代謝的各個層次的調控作用而與糖尿病存在著復雜

4、的聯(lián)系。近年來研究發(fā)現(xiàn)它還具有調節(jié)炎癥反應、活化巨噬細胞、促進血管生成、成纖維細胞生長、膠原合成、加速再上皮化等生理功能，而這些功能均與創(chuàng)面愈合進程有著密切的聯(lián)系。Goren等對3例糖尿病慢性足部潰瘍患者的皮膚組織進行了檢測，未發(fā)現(xiàn)任何Leptin受體的表達，推測“皮膚組織對Leptin的抵抗或不敏感"導致的Leptin作用缺陷可能是潰瘍愈合延遲的主要原因之一。這一發(fā)現(xiàn)為研究糖尿病慢性皮膚潰瘍發(fā)生機制的拓展了新的思路。 Lept

5、in的作用障礙是否是糖尿病慢性皮膚潰瘍獨有的致病因素?其與受體在糖尿病慢性皮膚潰瘍中的表達與非糖尿病原因導致的慢性皮膚潰瘍和正常皮膚組織中的表達有何具體不同?二者的表達呈怎樣的變化關系及臨床意義?這些問題的解答對進一步揭示Leptin在糖尿病慢性皮膚潰瘍難愈合機制中的作用具有非常重要的意義。 基于已有研究結果及對上述問題的思考，我們采用以醫(yī)院為基礎的病例對照研究，選取糖尿病慢性皮膚潰瘍、非糖尿病慢性皮膚潰瘍及正常人皮膚組織為研究

6、對象，通過采集上述潰瘍邊緣皮膚組織及正常人皮膚組織制作病理切片，觀察其組織學區(qū)別。應用免疫組織化學法檢測Leptin及其功能受體OB-RL在三組皮膚組織中的表達，觀察它們的定位表達特征。應用RT-PCR的方法，半定量檢測三組皮膚組織Leptin及其受體mRNA的表達水平，擬結合分子生物學技術進一步探討Leptin及其功能受體在糖尿病慢性皮膚潰瘍形成及難愈合機制中的作用，并探討兩種蛋白表達的臨床意義，為進一步預防和治療糖尿病慢性皮膚潰瘍提

7、供新的實驗資料。 瘦素及其受體在糖尿病慢性皮膚潰瘍組織中表達及臨床意義的研究【目的】 觀察瘦素(Leptin)及其受體OB-RL在糖尿病慢性皮膚潰瘍邊緣皮膚組織中的表達特征并與正常皮膚組織和非糖尿病慢性皮膚潰瘍進行對比，探討Leptin及其受體在糖尿病慢性皮膚潰瘍發(fā)生及難愈合機制中的作用和臨床意義。 【方法】 1．以年齡、性別匹配的糖尿病慢性皮膚潰瘍、非糖尿病慢性皮膚潰瘍的潰瘍邊緣皮膚組織各10例為實驗對

8、象，以正常人皮肽組織為對照。 2．潰瘍患者組記錄潰瘍形成時間。 3．采用HE常規(guī)染色觀察三組皮膚基本組織學變化。 4．免疫組織化學方法觀察三組Leptin及OB-RL蛋白的定位和表達差異。 5．半定量逆轉錄PCR法檢測糖尿病慢性皮膚潰瘍組及正常對照組Leptin及OB-RL兩種mRNA的表達。 6．統(tǒng)計分析兩種蛋白表達量與潰瘍形成時間的關系。 【結果】 1、糖尿病慢性皮膚潰瘍組及非

9、糖尿病慢性皮膚潰瘍組的潰瘍邊緣皮膚組織均具有典型的組織學改變，與正常皮膚清晰的表皮復層結構、豐富且規(guī)則、致密的膠原排列形成了鮮明的組織學反差。正常皮膚組、非糖尿病慢性皮膚潰瘍組和糖尿病慢性皮膚潰瘍組的表皮層厚度分別為0.99±0.23mm、1.75±0.42mm、1.63±0.33mm，真皮層厚度分別為2.71±0.38mm、1.43±0.38mm、1.38±0.41。mm。兩組潰瘍邊緣皮膚組織表皮層厚度與正常對照組皮膚相比均明顯增厚、

10、真皮層厚度均明顯變薄，差異有統(tǒng)計學意義，(均P<0.01)。 2、Leptin及其受體OB-RL在正常對照組、非糖尿病慢性皮膚潰瘍組和糖尿病慢性皮膚潰瘍組邊緣皮膚組織的表皮基底層細胞、成纖維細胞、皮脂腺細胞、汗腺細胞和血管內皮細胞的細胞膜和胞漿中均有表達。Leptin在三組中的陽性細胞率分別為36.5±4.8％、68.6±9.2％和61.0±7.6％，兩潰瘍組表達較正常皮膚組相比差異有顯著性意義(均P<0.01)，組間無顯著性差

11、異。OB-RL在三組中的陽性細胞率分別為36.2±5.1％、75.4±6.31％和22.4±5.09％，糖尿病慢性皮膚潰瘍邊緣皮膚組織中OB-RL的表達較另外兩組均明顯減少(均P<0.01)。OB-RL在非糖尿病慢性皮膚潰瘍邊緣皮膚組織炎性細胞中呈大量強陽性表達與非糖尿病慢性皮膚潰瘍相比差異顯著。3、糖尿病慢性潰瘍組皮膚組織Leptin mRNA及OB-RLmRNA的基因表達水平均較正常人皮膚組減少，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。

12、 4、糖尿病慢性皮肽潰瘍出現(xiàn)時間與Leptin蛋白的表達無相關關系(r=0.142P>0.05)，與OB-RL蛋白表達則呈負相關關系(r=-0.663 P<0.05)。 【結論】 1.糖尿病慢性皮膚潰瘍不缺乏Leptin蛋白的表達。與非糖尿病慢性皮膚潰瘍難愈合機制不同，受體OB-RL表達下調導致Leptin修復信號不能正常傳遞可能是其愈合延遲的重要原因之一； 2.慢性創(chuàng)面的Leptin可能主要來自脂肪組織，