低濃度Aβ(1-42)單體-寡聚體及一氧化碳供體對SN56細(xì)胞存活率的影響.pdf

1、阿爾茨海默病(Aizheimer's disease,AD)是一種神經(jīng)退行性疾病,以認(rèn)知功能障礙和記憶缺失為主要臨床表現(xiàn),成為目前危害老年人健康的重要疾病,且其發(fā)病率有逐年升高的趨勢。1906年AD的典型臨床表現(xiàn)和病理特征被Alois Alzheimer第一次系統(tǒng)清晰地描述,但到現(xiàn)在,人們對AD確切病因的認(rèn)識仍不完全。AD以腦內(nèi)β-淀粉樣多肽(Beta-amyloidpepfide,Aβ)在老年斑中的不規(guī)則自發(fā)組裝、沉積和神經(jīng)纖維纏結(jié)為

2、主要特點(diǎn)。其中Aβ(1-42)是受損腦內(nèi)老年斑的主要淀粉樣成分,表明其在淀粉樣神經(jīng)退行性改變和相關(guān)的AD神經(jīng)行為損害中的關(guān)鍵作用。容易引起AD發(fā)病的Aβ(1-42)的存在形式及濃度存在很多爭議,也是近年來國內(nèi)外研究的重點(diǎn)。內(nèi)生性一氧化碳(Carbon monoxide,CO)是體內(nèi)一種重要的化學(xué)遞質(zhì),在某些細(xì)胞類型中可以起到抗細(xì)胞凋亡的作用,而它在神經(jīng)細(xì)胞中的作用尚待明確。最近,轉(zhuǎn)換型金屬羰基復(fù)合物已被確認(rèn)為一種潛在的一氧化碳釋放分子(

3、Carbon monoxide releasing molecules,CORMs),因?yàn)槠鋼碛袑O傳遞到周圍組織和器官,而易化CO藥理作用的能力。它含有CO和—系列重金屬,如鈷、鐵、鎳、釕等。由這些金屬釋放的CO可以受到光激活、溫度、PH值和周圍環(huán)境的調(diào)節(jié)。三羰基三氯代釕二聚物(Tricarbonyldichlororuthenium(Ⅱ)dimer),已經(jīng)被證實(shí)為CORMs新家族中的一員,通常被稱為——CORM-2。大量研究證實(shí),

4、它可以對某些細(xì)胞起到抗凋亡的作用,因此目前已經(jīng)被當(dāng)做一種有效的CO供體,廣泛的應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)研究中。
　　 目的:1通過觀察低濃度的Ap(1-42)單體/寡聚體對SN56細(xì)胞存活率的影響,來了解SN56細(xì)胞對低濃度Ap(1-42)的易感性。2通過觀察Aβ(1-42)單體/寡聚體與不同濃度的CO供體——CORM-2共同作用下SN56的細(xì)胞存活率的變化,來了解CORM-2能否對膽堿能SN56細(xì)胞起到保護(hù)作用。
　　 方法:

5、>　　 1、細(xì)胞培養(yǎng)
　　 SN56細(xì)胞培養(yǎng)于37℃,95％空氣,5％CO2環(huán)境中。以濃度為0.05％的EDTA-Ca2+胰蛋白酶消化傳代。將傳代后的細(xì)胞以相同濃度種植于96-孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,待其充分增殖及貼壁后(3天左右),在lmM雙丁酰環(huán)磷酰胺(cAMP)及1μM視磺酸(RA)環(huán)境中分化3天,得到分化的SN56細(xì)胞。
　　 2、分組
　　 將細(xì)胞分為四組,分別為:對照組、A13(1-42)組、Aβ(1-42

6、)+CORM-250μM組、A13(1-42)+CORM-2100μM組。將96-孔板的前三列設(shè)為空白對照組,不加任何處理因素,其余每列按順序分別加入A13(1-42)10nM、Aβ(1-42)100nM、Aβ(1-42)1μM、Aβ(1-42)10nM+CORM-250μM、Aμ(1-42)100nM+CORM-250μM、Aβ(1-42)1CORM-250μM、Aβ(1-42)10nM+CORM-2100μM、Ap(1-42)100

7、nM+CORM-2100μM、Aβ(1-42)1μM+CORM-2100μM。培養(yǎng)3天后對各組進(jìn)行細(xì)胞存活率的測定。
　　 3、MTT法檢測細(xì)胞存活率
　　 96孔板每孔加MTT溶液11μl。然后在CO2溫箱孵育3小時。每孔加入異丙醇和氯化氫的混合液111μl,反復(fù)抽吸混勻放置2-5min。以570nm波長測定各孔光吸收值,記錄并標(biāo)化成細(xì)胞死亡率。
　　 4、統(tǒng)計(jì)方法
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果用(-x)±s表示,數(shù)

8、據(jù)處理采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件,多個獨(dú)立樣本的比較進(jìn)行Kruskal-Wa11is檢驗(yàn),兩相關(guān)樣本比較進(jìn)行Wilcoxon檢驗(yàn),P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:單純Aβ(1-42)組細(xì)胞存活率分別為(79.73+0.94)％、(67.99+0.79)％、(60.42±0.62)％,隨Aβ(1-42)濃度增加而下降。Aβ(1-42)與CORM-250μM共同作用后,細(xì)胞存活率為(75.15+0.096)％、(63.20

9、±0.17)％、(55.33±0.19)％,分別比單純Aβ(1-42)組存活率下降。Aβ(1-42)與CORM-21OOμM共同作用后細(xì)胞存活率分別為:(73.20±0.27)％、(64.34±0.11)％、(54.17±0.12)％,較單純Aβ(1-42)組降低,但與Aβ(1-42)+CORM-250μM組比較,其降低細(xì)胞存活率的作用存在差異。
　　 結(jié)論:低濃度Aβ(1-42)單體/寡聚體可降低SN56細(xì)胞的存活率,并且濃度