一氧化碳對肥胖狀態(tài)巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響.pdf

1、目的:
　　肥胖被認(rèn)為是一種慢性炎癥狀態(tài),肥胖患者往往伴有游離脂肪酸(FFA)的升高,其與巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)的激活密切相關(guān)。CO是一種具有抗炎作用的分子,本實驗利用CO對FFA刺激的巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)進(jìn)行干預(yù),檢測其對巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)相關(guān)蛋白NF-κB、GRP78和因子TNF-α、IL-6的影響,初步探討CO對FFA刺激巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用及機制,為肥胖及其相關(guān)疾病發(fā)病機制的研究和治療提供新的方向和思路。
　　方法:

2、>　　1.RAW264.7巨噬細(xì)胞體外培養(yǎng)。
　　2.MTT法檢測不同濃度FFA對巨噬細(xì)胞活力的影響。
　　3.不同濃度、時間點用含F(xiàn)FA的DMEM培養(yǎng)基作用于巨噬細(xì)胞,收集細(xì)胞上清,ELISA法檢測炎癥因子TNF-α、IL-6的變化,以確定FFA的最佳實驗濃度。
　　4.不同濃度CORM-2(CO釋放分子)干預(yù)FFA刺激的巨噬細(xì)胞,收集細(xì)胞上清ELISA法檢測炎癥因子TNF-α、IL-6的變化,以確定CO的最佳實驗濃

3、度。
　　5.將狀態(tài)良好的巨噬細(xì)胞分為空白對照組、FFA組、CO對照組、FFA+CO干預(yù)組,處理24h后分別收集細(xì)胞上清和細(xì)胞。WesternBlot檢測p-NF-κB和GRP78蛋白表達(dá)水平,ELISA法檢測炎癥因子TNF-α、IL-6的變化。
　　結(jié)果:
　　1.MTT法檢測不同濃度FFA(25、50、100、200μM)對巨噬細(xì)胞毒性的影響,結(jié)果表明與空白對照組比較,以上濃度的FFA對巨噬細(xì)胞均無毒性影響。

4、>　　2.含不同濃度FFA的培養(yǎng)基作用于RAW264.7巨噬細(xì)胞,TNF-α水平隨著FFA處理時間延長而逐漸升高,24h變化最明顯,IL-6表水平在0-12h變化不明顯,24h迅速增加;在同一時間點,隨著FFA濃度增加,TNF-α、IL-6水平逐漸升高。據(jù)此,最佳FFA處理濃度和檢測時間分別確定為100μM和24h。
　　3.用不同濃度的CORM-2(10、50、100、200μM)干預(yù)100μMFFA刺激的巨噬細(xì)胞后,隨著COR

5、M-2濃度的增加,炎癥因子TNF-α、IL-6水平逐漸降低;100μM與200μMCORM-2處理結(jié)果無顯著差異,故CORM-2最佳濃度選取100μM。
　　4.與空白對照組相比,FFA組p-NF-κB、GRP78蛋白表達(dá)水平明顯升高,CORM-2干預(yù)后p-NF-κB、GRP78蛋白表達(dá)水平均顯著降低。
　　結(jié)論:
　　1.FFA刺激可引起巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng),炎癥反應(yīng)隨著FFA的劑量增加和作用時間延長而增強。