類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎兩種治療方法的可行性研究.pdf

1、目的： 目前對(duì)于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的治療主要是通過(guò)藥物之間的聯(lián)合運(yùn)用控制疾病的發(fā)展。而隨著研究的深入，通過(guò)神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)及基因工程的方法控制炎癥的發(fā)展也在研究中。本研究通過(guò)對(duì)后兩者治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的可行性探討，期望達(dá)到如下目的 1.以膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎(CIA)大鼠為對(duì)象觀察不同足爪關(guān)節(jié)的破壞特點(diǎn)，為深入了解該模型發(fā)展的病理過(guò)程提供有益的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 2.基于目前膽堿能抗炎新理論設(shè)計(jì)迷走神經(jīng)懸吊刺激術(shù)，探討不同觀察時(shí)間段內(nèi)迷走

2、神經(jīng)懸吊對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型-膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎大鼠發(fā)病的影響。 3.通過(guò)結(jié)合EGFP-IL-1Ra質(zhì)粒體外轉(zhuǎn)染細(xì)胞系，探討新型膽固醇衍生物陽(yáng)離子脂質(zhì)體作為基因工程載體和應(yīng)用該載體攜帶基因治療膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎大鼠的可行性。 方法： 1.牛Ⅱ型膠原和福氏不全佐劑聯(lián)合誘導(dǎo)制作大鼠關(guān)節(jié)炎模型，二次注射后連續(xù)時(shí)間段內(nèi)分別進(jìn)行后足體積測(cè)量、關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)分、放射學(xué)指數(shù)評(píng)估。8個(gè)月后處死動(dòng)物，進(jìn)行組織學(xué)觀察。對(duì)模型動(dòng)物不同足部關(guān)節(jié)

3、的組織學(xué)破壞及破骨細(xì)胞分布特點(diǎn)進(jìn)行評(píng)估。 2.聯(lián)合誘導(dǎo)制作關(guān)節(jié)炎大鼠模型30只，二次免疫后10天行迷走神經(jīng)懸吊術(shù)(手術(shù)組)，假手術(shù)組行單純迷走神經(jīng)分離，對(duì)照組不行任何操作。3組動(dòng)物在二次免疫后3個(gè)月內(nèi)定期進(jìn)行后足體積測(cè)量、關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)分、放射學(xué)指數(shù)評(píng)估及炎癥相關(guān)因子檢測(cè)。3月后處死動(dòng)物，進(jìn)行組織學(xué)觀察，對(duì)各組動(dòng)物足爪破壞的組織學(xué)指數(shù)及破骨細(xì)胞分布進(jìn)行評(píng)估。 3.如上所述聯(lián)合誘導(dǎo)制作關(guān)節(jié)炎大鼠模型30只，在二次免疫后8個(gè)月

4、內(nèi)進(jìn)行后足體積測(cè)量、關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)分、放射學(xué)指數(shù)評(píng)估及炎癥相關(guān)因子檢測(cè)。8個(gè)月后處死動(dòng)物，進(jìn)行組織學(xué)觀察對(duì)各組動(dòng)物足爪破壞的組織學(xué)指數(shù)及破骨細(xì)胞分布進(jìn)行評(píng)估。 4.將膽固醇衍生物脂質(zhì)體與EGFP-IL-1Ra質(zhì)粒按照不同比例進(jìn)行凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)，探討其體外最佳結(jié)合比例。參照此比例轉(zhuǎn)染HELA細(xì)胞，48小時(shí)后通過(guò)熒光顯微鏡觀察其轉(zhuǎn)染效果，MTT法檢測(cè)其細(xì)胞毒性。 結(jié)果： 1.隨著CIA大鼠疾病的發(fā)展，足爪關(guān)節(jié)炎指數(shù)逐漸增

5、長(zhǎng)(與對(duì)照組有顯著性差異)，二次免疫后35天達(dá)高峰。相應(yīng)的各足爪關(guān)節(jié)的放射學(xué)指數(shù)持續(xù)增高。而且發(fā)現(xiàn)足中部跗骨間關(guān)節(jié)最早受累，破壞最嚴(yán)重。組織學(xué)觀察顯示足部不同關(guān)節(jié)有不同的破壞特點(diǎn)。每種足部關(guān)節(jié)以一種損傷模式為主，多種模式可以并存。 2.在3個(gè)月的觀察時(shí)間內(nèi)手術(shù)組大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)、放射學(xué)指數(shù)、組織學(xué)指數(shù)、血中炎癥因子的水平均低于對(duì)照組。假手術(shù)組在早期有一定的療效，隨著時(shí)間的發(fā)展其作用逐漸消失。將觀察時(shí)間延長(zhǎng)到8個(gè)月時(shí)發(fā)現(xiàn)迷走神經(jīng)懸吊

6、術(shù)的炎癥抑制作用消失，最終3組動(dòng)物炎癥相關(guān)指數(shù)、放射學(xué)指數(shù)、組織學(xué)指數(shù)、血中炎癥因子之間的評(píng)估沒(méi)有差異。 3.新型膽固醇衍生物陽(yáng)離子脂質(zhì)體復(fù)合物與EGFP-IL-1Ra質(zhì)粒在質(zhì)量比為50:1時(shí)達(dá)到體外最有效結(jié)合。熒光顯微鏡下觀察結(jié)果表明，此脂質(zhì)體復(fù)合物攜帶IL-1Ra質(zhì)粒比單純質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞效率更高，而且細(xì)胞毒性小。 結(jié)論： 1.在CIA大鼠模型疾病發(fā)展的過(guò)程中每個(gè)足爪關(guān)節(jié)都具有特定的破壞模式，多種模式可以共同存于