PEG化可降解PEI-Et的構(gòu)建、篩選及Smad3基因輸送研究.pdf

1、動脈粥樣硬化有關(guān)的疾病是導(dǎo)致死亡最主要的原因，其血管存在不同程度的損傷。研究發(fā)現(xiàn)血管損傷后，血管平滑肌細(xì)胞由靜止的、分化狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)樵鲋碃顟B(tài)。血管平滑肌細(xì)胞增殖的分子機(jī)制還不清楚，其中之一與Smad3基因有關(guān)。血管損傷后轉(zhuǎn)化生長因子（TGF-β）的表達(dá)水平上調(diào)，TGF-β通過Smad3信號通路促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖。
　　將Smad3基因安全有效的轉(zhuǎn)入血管平滑肌細(xì)胞，基因載體是關(guān)鍵。在各類基因載體中，聚陽離子非病毒載體具有安全、基因

2、擔(dān)載大、化學(xué)結(jié)構(gòu)可控、易于化學(xué)修飾等優(yōu)點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)將PEI800Da作為基本結(jié)構(gòu)單元，以亞乙基二氯甲酸酯作為交聯(lián)劑合成陽離子聚合物-PEI-Et，并對其進(jìn)行聚乙二醇（PEG）修飾，以屏蔽PEI-Et表面過量的正電荷，使其在保有較高轉(zhuǎn)染活性的基礎(chǔ)上，降低載體的細(xì)胞毒性。
　　本論文第一部分研究內(nèi)容是將PEI-Et與PEG以不同的摩爾比例（1:1、2:1、1:2）合成三種不同的P EG-Et陽離子聚合物，并研究其與基因縮合形成的復(fù)合物的

3、特征、細(xì)胞毒性、轉(zhuǎn)染效率，以篩選出最佳基因輸送載體即PEG-Et1:1。第二部分研究內(nèi)容是將 PEG-Et1:1作為載體運(yùn)載shSmad3、Smad3基因進(jìn)入兔主動脈平滑肌細(xì)胞，運(yùn)用PCR、Western blot檢測細(xì)胞內(nèi)Smad3基因的表達(dá)，CCK8實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的增殖。
　　本論文中，我們成功合成PEG-Et1:1，證明其具有縮合基因的能力、細(xì)胞毒性低、轉(zhuǎn)染效率高。抑制血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)Smad3基因的表達(dá)，可抑制血管平滑肌細(xì)胞