Smad2與Smad3參與TGF-β誘導的后發(fā)性白內(nèi)障發(fā)生的研究.pdf

1、分類號：R77密級：不保密學位類別：科學學位團專業(yè)學位口。學校代碼：10062學號：2011601121學科門類：醫(yī)學又坪鼉科鼻號TlAN塒N__EOlCAL刪一lVE翻$lTY博士學位論文DoCToRALDISSERTATIoN論文題目：Smad2與Smad3參與TGFp誘導的后發(fā)性白內(nèi)障發(fā)生的研究TITLEImplicationofSmad2andSmad3intransforminggrowthfactorpinducedpost

2、eriorcapsularopacificationofhumanlensepithelialcells一級學科：臨床醫(yī)學二級學科：眼科學論文作者：李華指導教師：湯欣教授天津醫(yī)科大學研究生院二。一四年五月天津醫(yī)科大學博士學位論文中文摘要目的后發(fā)性白內(nèi)障(posteriorcapsularopacification，PCO)作為白內(nèi)障術后主要并發(fā)癥，可導致患者視力再次下降。多種細胞因子參與了后發(fā)性白內(nèi)障的發(fā)生發(fā)展過程，其中TGFp2的調(diào)節(jié)

3、作用尤為重要，是重要的Smad通路介導發(fā)生的。本研究旨在深入研究選擇性過表達Smad2或Smad3對后發(fā)性白內(nèi)障的發(fā)生分別所起的作用，研究TGF132／Smad2和TGF132／Smad3信號傳導通路在晶狀體上皮細胞生長、凋亡、遷移、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及細胞外基質(zhì)的調(diào)節(jié)作用，從而達到探索對后發(fā)性白內(nèi)障基因治療的目的。方法以pcDNA31為質(zhì)粒載體，分別構建Smad2和Smad3過表達載粒，轉(zhuǎn)化大腸桿菌，酶切、測序進行鑒定。體外培養(yǎng)人晶狀體上皮

4、細胞HLEB3，通過瞬時轉(zhuǎn)染方法分別過量表達Smad2或Smad3，并加入lng／mlTGFB2以選擇性激活TGF132／Smad2或TGFp2／Smad3信號傳導通路。通過MTT方法和流式細胞儀技術檢測TGF132／Smad2和TGF132／Smad3信號傳導通路對HLEB3的生長、凋亡的影響，通過Transwell小室檢測細胞的遷移能力。酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測細胞培養(yǎng)液上清的可溶性細胞外基質(zhì)表達情況。Westernblot，Realt

5、imePCR和免疫熒光染色檢測細胞外基質(zhì)、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關蛋白的表達。爭士甲三口木1成功構建Smad2、Smad3真核表達載體，進行酶切、測序分析，確定為所需序列。2Smad3過表達并激活TGF132／Smad3信號傳導通路可抑制HLEB3細胞的生長，與對照組相比有明顯意義(PO05)。選擇性激活TGF132／Smad3信號通路使細胞的凋亡率較激活TGF132／Smad2信號通路組明顯增加(PO05)。酶聯(lián)免疫吸附試驗發(fā)現(xiàn)Smad3過表