黃芪對(duì)增生性瘢痕TGF-β1的表達(dá)及其Smad3信號(hào)途徑的影響.pdf

1、目的：以穩(wěn)定有效的兔耳瘢痕為模型，通過(guò)對(duì)兔耳瘢痕的形態(tài)學(xué)、組織學(xué)、增生性瘢痕的厚度及硬度、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TGF-β1）及其Smad3信號(hào)表達(dá)的觀察，探討黃芪對(duì)兔耳創(chuàng)面瘢痕增生的抑制效應(yīng)和初步機(jī)制，為黃芪在臨床的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。
　　 方法：健康成年日本大耳白兔24只，體重1.8～2.5kg，兔耳健全，雌雄不論，用隨機(jī)數(shù)字表法分為6組：其中實(shí)驗(yàn)組3組：A組：濃度為1000 mg/ml黃芪治療組（高）、B組：濃度為500

2、 mg/ml黃芪治療組（中）、C組：濃度為250 mg/ml黃芪治療組（低）。對(duì)照組3組：D組：相同容積的生理鹽水對(duì)照組、空白對(duì)照組E組：未處理的瘢痕組、陰性對(duì)照組F組：正常兔耳皮膚，A、B、C、D、E、F各4只兔子，除外正常皮膚組，在每側(cè)的兔耳腹側(cè)中部做4個(gè)邊長(zhǎng)為1cm的正方形切口，創(chuàng)面間相距1cm，共160個(gè)創(chuàng)面。傷后21d局部注射黃芪液或生理鹽水，注射用量為0.2ml。在術(shù)后32d和43d，分2-次切取標(biāo)本，采用彩色超聲診斷儀（探

3、頭超聲頻率為13MHz）、瘢痕硬度精密測(cè)定儀分別測(cè)定不同時(shí)間的瘢痕和正常皮膚厚度和硬度及光鏡下觀察蘇木精.伊紅染色、Masson三色法膠原染色的組織結(jié)構(gòu)變化情況；采用RT-PCR、免疫組織化學(xué)法觀察瘢痕和正常皮膚組織中TGF-β1、Smad3mRNA水平和蛋白表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果：（1）術(shù)后8～12d創(chuàng)面結(jié)痂，16d創(chuàng)面逐漸上皮化、痂殼松動(dòng)并開(kāi)始脫落；21d創(chuàng)面全部上皮化，可見(jiàn)瘢痕增生明顯；術(shù)后28d瘢痕增生達(dá)高峰；43d逐

4、漸進(jìn)入消退期。（2）HE、Masson染色顯示：黃芪實(shí)驗(yàn)組真皮層變薄，成纖維細(xì)胞數(shù)量較少，膠原纖維排列規(guī)則，無(wú)膠原結(jié)節(jié)或者膠原結(jié)節(jié)不明顯；生理鹽水對(duì)照組及空白對(duì)照組真皮層較厚，成纖維細(xì)胞密集，膠原纖維排列紊亂或成旋渦狀，形成膠原結(jié)節(jié)；陰性對(duì)照組正常皮膚組織膠原束細(xì)小，排列規(guī)則。（3）黃芪實(shí)驗(yàn)組兔耳瘢痕變薄、硬度降低，TGF-β1及其Smad3信號(hào)的表達(dá)降低，與對(duì)照組相比，差異均有顯著性（P<0.05），實(shí)驗(yàn)組在傷后32d、43d時(shí)兩組間

5、差異也均有顯著性（P<0.05），而生理鹽水對(duì)照組和空白對(duì)照組間差異無(wú)顯著性（P>0.05）。
　　 結(jié)論：（1）保留軟骨，去除全層皮膚及軟骨膜后兔耳創(chuàng)面可以獲得明顯的瘢痕并且延長(zhǎng)瘢痕的增生期，形成有效穩(wěn)定的增生性瘢痕，可以用作動(dòng)態(tài)的觀察藥物治療瘢痕的效果；（2）創(chuàng)面上皮化后局部注射黃芪可明顯抑制瘢痕組織的增生，其作用機(jī)制之一是通過(guò)抑制TGF-β1及其下游信號(hào)Smad3的表達(dá)而實(shí)現(xiàn)的；（3）黃芪對(duì)兔耳瘢痕增生的抑制呈濃度劑量效應(yīng)