綠鰭馬面鲀性類固醇激素受體在生殖周期中的表達機制.pdf

1、綠鰭馬面鲀(Navodon septentrionalis)是我國的重要經(jīng)濟魚類,本研究以煙臺百佳水產(chǎn)公司人工養(yǎng)殖的綠鰭馬面鲀?yōu)檠芯繉ο?對其進行為期一年的周期采樣。運用免疫組織化學和性類固醇激素放射免疫測定法,對綠鰭馬面鲀的性腺和血清性類固醇激素進行了深入研究和分析,并采用分子生物學方法對綠鰭馬面鲀性類固醇激素受體進行了基因克隆與表達分析,得出結果與結論如下:
　　1.綠鰭馬面鲀性腺的免疫組織化學觀察
　　對綠鰭馬面鲀進行

2、為期一年的隔月采樣。對綠鰭馬面鲀性腺中雌激素受體α(ERα)和雄激素受體(AR)進行了定位,發(fā)現(xiàn)在卵巢、精巢發(fā)育的不同階段均存在兩種受體的不同程度的表達。在卵巢中,ERα在卵母細胞早期發(fā)育階段呈強的免疫陽性反應,而隨著卵母細胞的成熟,AR免疫反應逐漸增強,這都說明雌激素及其受體對卵巢發(fā)育早期階段起著關鍵作用,但雄激素及其受體對卵巢的作用機制尚不明確;精巢中的ERα和AR在精子發(fā)生各個時期的間質(zhì)細胞處均有強陽性反應,在生殖細胞處ERα較A

3、R有更高水平的表達,這說明雌激素及其受體對精巢的發(fā)育成熟起到關鍵作用,雄激素及其受體對生殖細胞的發(fā)育、成熟和維持也起著重要作用。
　　2.綠鰭馬面鲀ERs基因的克隆與時空表達分析
　　本實驗首次克隆到綠鰭馬面鲀?nèi)NERs基因:ERα cDNA核心序列共1410bp,編碼470個氨基酸;ERβ1 cDNA全長2192bp,包含一個開放閱讀框,編碼565個氨基酸;ERβ2 cDNA全長2363bp,包含一個開放閱讀框,可以編碼6

4、62個氨基酸。利用生物學軟件將綠鰭馬面鲀ERs的氨基酸序列與其它硬骨魚類及哺乳動物等進行多序列比對,發(fā)現(xiàn)了ERs的一些共有的結構特點,也發(fā)現(xiàn)了綠鰭馬面鲀ERs的一些特點。本實驗采用RT-PCR方法,檢測了ERs在性成熟雌、雄魚中11種組織中的分布情況,結果表明,綠鰭馬面鲀ERs在雌魚各組織中較雄魚的表達更廣泛,包括一些非生殖組織,如鰓、腎臟和脾臟等都檢測到mRNA表達,特別是綠鰭馬面鲀ERβ1只在雄魚性腺組織中檢測到表達,其他組織均未檢

5、測到表達信號。此外,結合血清E2、T及GSI的周年變化,對ERs在性腺中的周年表達情況進行了分析,發(fā)現(xiàn)綠鰭馬面鲀ERs與血清E2和GSI都呈現(xiàn)出一定的相關性,這表明E2和ERs可能影響性腺的發(fā)育成熟。
　　3.綠鰭馬面鲀AR基因的克隆與時空表達分析
　　本實驗首次克隆到綠鰭馬面鲀AR部分基因序列,得到AR cDNA核心序列共769bp,共編碼256個氨基酸。利用生物學軟件將該片段推導得到的氨基酸序列與其它硬骨魚類及哺乳動物等