適配子型壓電石英晶體傳感器的構(gòu)建及其與抗體型壓電免疫傳感器的比較研究.pdf

1、目的： 通過(guò)建立壓電石英晶體振蕩頻率檢測(cè)平臺(tái)，利用適配子作為壓電生物傳感器的生物識(shí)別分子，構(gòu)建適配子型壓電石英晶體生物傳感器，并用其對(duì)人免疫球蛋白E進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)各項(xiàng)檢測(cè)參數(shù)進(jìn)行研究，并與抗體型壓電免疫生物傳感器進(jìn)行比較。 方法： 1.利用精細(xì)微加工工藝制作的石英晶體作為換能器，并在此基礎(chǔ)上制備生物傳感器微陣列，以構(gòu)建壓電石英晶體生物傳感器檢測(cè)平臺(tái)。 2.采用生物素-親和素法將抗人免疫球蛋白適配子固定于石英

2、晶體表面，用于人免疫球蛋白E的標(biāo)準(zhǔn)血清及臨床標(biāo)本的檢測(cè)。根據(jù)頻率變化和IgE濃度之間的關(guān)系繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 3.探索適配子型壓電生物傳感器進(jìn)行實(shí)際檢測(cè)的準(zhǔn)確性、最低檢測(cè)限等檢測(cè)參數(shù)，并對(duì)其非特異結(jié)合反應(yīng)、再生條件、保存時(shí)間等進(jìn)行研究。 4.分別用適配子型壓電生物傳感器和抗體型壓電免疫傳感器對(duì)IgE標(biāo)準(zhǔn)品和血清標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，并對(duì)兩者的檢測(cè)范圍、最低檢測(cè)限、檢測(cè)時(shí)間、非特異性結(jié)合實(shí)驗(yàn)、再生實(shí)驗(yàn)、保存實(shí)驗(yàn)等進(jìn)行研究，以比較適配子

3、型壓電生物傳感器和抗體型壓電免疫傳感器進(jìn)行實(shí)際檢測(cè)的優(yōu)越性。 結(jié)果： 1.所構(gòu)建的適配子型壓電生物傳感器的檢測(cè)范圍為2.5-200μg/L，最低檢測(cè)值為3ug/L，與化學(xué)發(fā)光法相比相關(guān)系數(shù)為0.992，具有良好的檢測(cè)性能。 2.適配子型壓電生物傳感器對(duì)BSA、HSA、IgG、IgM等干擾蛋白的檢測(cè)信號(hào)顯著低于特異性IgE的檢測(cè)信號(hào)(＜5％)。 3.在選用的再生試劑中，EDTA表現(xiàn)了最好的再生效果，適配子芯

4、片經(jīng)過(guò)10次再生后仍可保留80％的生物學(xué)活性。 4.對(duì)適配子芯片進(jìn)行保存實(shí)驗(yàn)，在7天內(nèi)穩(wěn)定性幾乎沒(méi)有改變，隨后穩(wěn)定性逐漸下降，3周后檢測(cè)活性約為初始檢測(cè)的90％。 5.適配子型壓電生物傳感器和抗體型免疫傳感器均可在15min內(nèi)完成檢測(cè)，都具有良好的檢測(cè)靈敏度、線性范圍和特異性，準(zhǔn)確性與化學(xué)發(fā)光法相當(dāng)，對(duì)結(jié)果進(jìn)行回歸分析吻合性較好。 6.適配子型生物傳感器的再生和保存性能優(yōu)于抗體型免疫傳感器。 結(jié)論：

5、 1.所構(gòu)建的適配子型壓電生物傳感器和化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行人血清標(biāo)本IgE檢測(cè)的相關(guān)系數(shù)為0.992。適配子型壓電生物傳感器可以對(duì)復(fù)雜生物樣本中的IgE進(jìn)行高靈敏度、高特異性的檢測(cè)。 2.適配子型壓電生物傳感器和抗體型免疫傳感器均可在15分鐘內(nèi)完成對(duì)IgE的檢測(cè)，可為患者提供更快速的診斷，同時(shí)操作更加簡(jiǎn)便。與傳統(tǒng)的檢測(cè)方法相比，傳感器方法具有無(wú)需標(biāo)記，無(wú)需對(duì)標(biāo)本進(jìn)行預(yù)處理的特點(diǎn)。 3.適配子型壓電生物傳感器在最低檢測(cè)限、結(jié)合