應(yīng)用膜片鉗電生理技術(shù)研究多肽毒素對(duì)鉀離子通道的作用機(jī)制.pdf

1、離子通道是膜蛋白的一種，它在生命活動(dòng)中起著非常重要的作用。由于離子通道的一些突變會(huì)導(dǎo)致人類疾病，因此相關(guān)藥理學(xué)方面的研究也非常重要。目前對(duì)離子通道的研究主要有利用X射線晶體衍射或者液體核磁共振技術(shù)解析它們的結(jié)構(gòu)，利用膜片鉗電生理技術(shù)研究它們的功能等等。動(dòng)物多肽毒素通常能夠作用于離子通道，調(diào)節(jié)它們的開(kāi)放和關(guān)閉。它們是研究離子通道結(jié)構(gòu)與功能的工具，同時(shí)也能被改造或修飾，用于疾病的治療。本文中主要用蛋白異源表達(dá)純化的方法獲得多肽毒素，用液體核

2、磁共振技術(shù)以及膜片鉗電生理技術(shù)研究動(dòng)物多肽毒素和鉀離子通道的相互作用。論文共分為四個(gè)章節(jié)。
　　第一章介紹了鉀離子通道和相關(guān)動(dòng)物多肽毒素的基本知識(shí)。包括鉀離子通道的類型，鉀離子通道相關(guān)疾病以及多肽毒素的種類、結(jié)構(gòu)，與鉀離子通道相互作用模式等。
　　第二章對(duì)膜片鉗電生理技術(shù)作了簡(jiǎn)單的介紹，包括膜片鉗的幾種基本模式以及衍生技術(shù)，主要的相關(guān)設(shè)備等。
　　第三章是蜈蚣多肽毒素SSD609對(duì)KCNQ1/KCNE1鉀離子通道作用機(jī)

3、制的研究。作用于KCNQ1/KCNE1鉀離子通道的多肽毒素很少，目前只有兩篇文章報(bào)道過(guò)相關(guān)內(nèi)容，蜈蚣毒腺中提取的SSD609就是其中的一種。而KCNQ1/KCNE1鉀離子通道與人類心臟疾病密切相關(guān)，作用于它的毒素有潛在的作為藥物的可能。本章我們通過(guò)大腸桿菌異源表達(dá)純化的方法獲得較為大量的SSD609多肽毒素，通過(guò)膜片鉗電生理技術(shù)驗(yàn)證其抑制Iks電流的功能，證明其與天然狀態(tài)的毒素?fù)碛蓄愃频纳砉δ堋Ｖ罄靡后w核磁共振技術(shù)解析了它的結(jié)構(gòu)，

4、由三段α螺旋構(gòu)成，此結(jié)構(gòu)在動(dòng)物多肽毒素中非常少見(jiàn)。根據(jù)結(jié)構(gòu)和功能提供的信息，猜測(cè)其作用于KCNE1輔助亞基，因此設(shè)計(jì)了KCNE1上相關(guān)位點(diǎn)的突變，結(jié)合電生理實(shí)驗(yàn)推斷出SSD609與KCNQ1/KCNE1可能的相互作用方式，首次提出多肽毒素作用于輔助亞基，這為以后進(jìn)一步的研究打下基礎(chǔ)。
　　第四章主要介紹了蝎毒素IbTX的表達(dá)純化以及它對(duì)BK鉀離子通道的抑制作用。異源表達(dá)多肽毒素為一種獲取毒素的常用方法，相對(duì)來(lái)說(shuō)這種方法時(shí)間短、花費(fèi)