MMTV通過Wnt信號通路誘導(dǎo)TA2小鼠乳腺癌的發(fā)生.pdf

1、目的:津白Ⅱ(Tientsin Albinao2,TA2)小鼠具有高自發(fā)性乳腺癌特點(diǎn),是研究人乳腺癌的良好動物模型,本研究通過研究Wnt通路相關(guān)蛋白、小鼠乳腺腫瘤病毒(mouse mammary tumor virus,MMTV)在TA2小鼠乳腺癌生成中的作用,闡述TA2小鼠自發(fā)性乳腺癌發(fā)生相關(guān)機(jī)制。
　　方法:
　　1.正常雌性成年處女TA2小鼠60只,鼠齡6～8周,體重20~25g,將小鼠去勢后隨機(jī)分成四組,聯(lián)合給藥組(

2、CT組,給藥劑量17β-雌二醇0.02mg+孕酮0.2mg溶解于0.1ml麻油中)、雌二醇組(E組,給藥劑量17β-雌二醇0.02mg溶解于0.1ml麻油中)、孕酮組(P組,給藥劑量孕酮0.2mg溶解于0.1ml麻油中)及對照組(C組,給予0.1ml純麻油),給藥頻率1次/2周,10月后觀察雌激素、孕激素對TA2小鼠乳腺腫瘤生成數(shù)量的影響,并分析雌激素、孕激素在TA2小鼠乳腺癌發(fā)生過程中的作用。
　　2.Real-time PCR

3、方法分別檢測腫瘤及乳腺組織中 MMTV-LTR mRNA、Wnt1 mRNA、Wnt5a mRNA、Wnt5b mRNA、Wnt10b mRNA表達(dá)水平并分析其相關(guān)性。RT-PCR方法檢測各組小鼠腫瘤及乳腺組織中MMTV-LTR mRNA表達(dá)。
　　3.免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測TA2小鼠正常乳腺組織、自發(fā)性成瘤TA2小鼠乳腺癌前病變組織及腫瘤組織中Wnt1、Wnt5a、β-連環(huán)蛋白(β-catenin)的表達(dá)。進(jìn)一步統(tǒng)計分析Wnt1、

4、Wnt5a、β-catenin在TA2小鼠正常乳腺組、自發(fā)性成瘤TA2小鼠乳腺癌前病變組及腫瘤組中腫瘤陽性細(xì)胞表達(dá)率,并分別比較差異性。
　　結(jié)果:
　　1.15只聯(lián)合給藥組小鼠中有10只在連續(xù)給藥10月后發(fā)瘤(腫瘤發(fā)生率66.7％),而其他三組無一例發(fā)瘤(腫瘤發(fā)生率0%)。聯(lián)合給藥組中,10只小鼠的腫瘤均為單發(fā),5個小鼠腫瘤定位于左下腹,3個小鼠腫瘤定位于右下腹,兩個小鼠腫瘤位于頸部。聯(lián)合給藥組小鼠乳腺癌細(xì)胞呈巢狀、實(shí)體和

5、腺管狀排列,細(xì)胞核分裂象多見;聯(lián)合給藥組小鼠乳腺導(dǎo)管不規(guī)則,有些導(dǎo)管形成囊狀結(jié)構(gòu),乳腺導(dǎo)管比正常乳腺導(dǎo)管大;雌激素組、和孕激素組小鼠的乳腺導(dǎo)管規(guī)則,導(dǎo)管上皮細(xì)胞形態(tài)沒有明顯異常;而對照組小鼠乳腺導(dǎo)管萎縮,為脂肪組織所替代。
　　2.Real-time PCR結(jié)果顯示:Wnt1 mRNA、Wnt5a mRNA、Wnt5b mRNA、Wnt10b mRNA在聯(lián)合給藥組小鼠乳腺組織表達(dá)水平最高,同時對照組小鼠乳腺上皮細(xì)胞中表達(dá)水平最低,

6、兩組之間分別比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000)。較其他組比較,聯(lián)合給藥組小鼠腫瘤及乳腺組織中MMTV-LTR mRNA表達(dá)量較高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000)。
　　3.免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果提示:Wnt1、Wnt5a在小鼠正常乳腺組織中陰性表達(dá),在自發(fā)性成瘤小鼠乳腺癌前病變和乳腺癌組織細(xì)胞質(zhì)表達(dá)且在自發(fā)性成瘤小鼠乳腺癌前病變的表達(dá)強(qiáng)度高于其在乳腺癌組織中表達(dá)。β-catenin在正常小鼠乳腺組織主要在細(xì)胞膜上表達(dá),在自

7、發(fā)性成瘤TA2小鼠乳腺癌前病變組織及腫瘤組織胞質(zhì)中均有異常表達(dá),且在腫瘤組織的表達(dá)強(qiáng)度高于其在癌前病變組織中的表達(dá)。Wnt1、Wnt5a、β-catenin在自發(fā)性成瘤小鼠乳腺癌前病變組、腫瘤組中的陽性細(xì)胞表達(dá)率顯著高于正常乳腺組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000)。Wnt1、Wnt5a在小鼠乳腺癌前病變組細(xì)胞陽性率高于腫瘤組,其中 Wnt1差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.001),Wnt5a差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.239)。β-caten

8、in在腫瘤組的腫瘤細(xì)胞陽性率明顯高于乳腺癌前病變組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.005)。
　　結(jié)論:
　　1.在構(gòu)建的TA2小鼠動物模型中,雌孕激素聯(lián)合給藥促進(jìn)TA2小鼠乳腺腫瘤形成。MMTV及Wnt信號通路相關(guān)蛋白在TA2小鼠乳腺癌組織中表達(dá)異常,可能在TA2小鼠乳腺癌形成過程中發(fā)揮重要作用。
　　2.在TA2小鼠自發(fā)性乳腺癌組織中,Wnt信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)異常,提示它們在TA2小鼠自發(fā)性乳腺癌形成過程中發(fā)揮重要作