茶枝柑皮提取物抗氧化有效成分的研究.pdf

1、課題組前人在實驗室規(guī)模進行了茶枝柑皮抗氧化提取物的提取工藝研究，并進行了提取物的體外抗氧化實驗和動物試驗，發(fā)現(xiàn)提取物對D-半乳糖致衰老模型小鼠有顯著效應(yīng)，能使血、肝和腦的丙二醛（MDA）含量降低，使腦組織、血漿、肝組織超氧化歧化酶（SOD）活力提高，使血液中的谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活力提高。本文應(yīng)用中藥血清藥物化學(xué)研究的思路，對給藥大鼠血清中提取物的原型成分進行分離及鑒定;從提取物中分離提純出6個多甲氧基黃酮類化學(xué)成分，其中

2、4個成分被檢出為入血的原型成分；并構(gòu)建了細胞的氧化應(yīng)激損傷模型，對6個多甲氧基黃酮類成分和提取物進行了抗氧化活性的細胞篩選試驗，為茶枝柑皮抗氧化提取物的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供依據(jù)。
　　綜合本文的研究內(nèi)容以及實驗結(jié)果，概括如下：
　　1.建立分離分析茶枝柑皮提取物的HPLC分析法
　　采用HPLC法，通過對流動相組成、洗脫梯度、流動相pH值、流速、柱溫等進行系統(tǒng)考察，確定一個較佳的色譜條件，制訂出分離效果較佳、信息豐富且

3、出峰時間適中的茶枝柑皮提取物主成分的分離色譜圖。
　　2.茶枝柑皮提取物血中藥源性成分分析
　　采用HPLC法分析茶枝柑皮提取物給藥后的含藥血清，鑒定茶枝柑皮提取物灌胃后大鼠血中移行成分。利用HPLC法建立空白血清和含藥血清的色譜圖，綜合比較分析茶枝柑皮提取物、含藥血清及空白血清色譜圖譜的異同，并結(jié)合參考文獻，分析茶枝柑皮提取物在動物血清中的移行成分。在茶枝柑皮提取物含藥血清中發(fā)現(xiàn)了17個入血成分，其中5個為原型成分，入血原

4、型成分主要為多甲氧基黃酮類的川陳皮素和橘皮素等成分。
　　3.茶枝柑皮提取物多甲氧基黃酮類成分的提取、分離及鑒定
　　根據(jù)茶枝柑皮提取物血中藥源性成分分析結(jié)果的指導(dǎo)，對茶枝柑皮80％乙醇提取物的石油醚提取部位和乙酸乙酯提取部位，利用硅膠柱色譜、制備薄層、重結(jié)晶等方法進行分離純化。再根據(jù)化合物的理化性質(zhì)及波譜數(shù)據(jù)進行結(jié)構(gòu)分析鑒定，共分離出6個多甲氧基黃酮類化學(xué)成分，分別鑒定為5，7，8，4'-四甲氧基黃酮、5，6，7，3'，4

5、'-五甲氧基黃酮、5，6，7，8，3'，4'-六甲氧基黃酮（川陳皮素）、3，5，6，7，8，3'，4'-七甲氧基黃酮、5，6，7，8，4'-五甲氧基黃酮（橘皮素）、5-羥基-6，7，8，3'，4'-五甲氧基黃酮。其中川陳皮素、橘皮素、5，6，7，3'，4'-五甲氧基黃酮、3，5，6，7，8，3'，4'-七甲氧基黃酮為入血成分；5，7，8，4'-四甲氧基黃酮、5-羥基-6，7，8，3'，4'-五甲氧基黃酮在含藥血清中未檢出。
　　4

6、.茶枝柑皮提取物及黃酮類成分對PC12細胞氧化損傷的保護
　　本文選取了七個黃酮類成分和提取物為研究對象，用噻唑蘭（MTT）比色法測定細胞活力，檢測細胞是否受氧化應(yīng)激損傷及其受損程度，構(gòu)建H2O2誘導(dǎo)的PC12細胞氧化應(yīng)激損傷模型，篩選出致傷制劑H2O2的最佳濃度。
　　采用以下三項指標來衡量受試成分的抗氧化活性：硫代巴比妥酸法(TBARS)測定脂質(zhì)過氧化物產(chǎn)物丙二醛（MDA）；抗氧化酶類（包括超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱

7、甘肽過氧化氫酶（GSH-Px））的活性檢測。
　　試驗結(jié)果表明，H2O2誘導(dǎo) PC12細胞后與正常對照組比較，MDA含量升高，GSH-Px和SOD活性降低，證明已成功構(gòu)建PC12細胞體外氧化應(yīng)激模型。而受試成分處理組對SOD和GSH-Px活性降低具有抑制作用，并使MDA含量降低。入血成分對細胞的這種保護作用較未入血的成分明顯。推測茶枝柑皮提取物中的多甲氧基黃酮類成分，可能通過提高SOD和GSH-Px活性和降低MDA含量，減少氧化應(yīng)