用DefH9-iaaM5基因和Rol ABC基因轉(zhuǎn)化沙田柚的研究.pdf

1、沙田柚(Citrus grandis var. shatinyou Hout) 是蕓香科柑桔屬中著名的柚類良種，在我國栽培歷史悠久，品種繁多，栽種范圍廣，面積大，年產(chǎn)量 1866985噸，遠銷東南亞，但由于其種子多，平均每個果實種子數(shù)約為120多粒，嚴重影響了其商品價值和在國際市場上的競爭能力：此外，沙田柚樹體高大，不便管理，生產(chǎn)成本較高。因此，增加無核和矮化性狀已成為沙田柚遺傳改良的重要研究課題。本文以沙田柚為應(yīng)用研究對象，通過對離體

2、再生條件、抗生素篩選條件以及根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)沙田柚遺傳轉(zhuǎn)化條件的優(yōu)化，建立了高效的離體再生系統(tǒng)和遺傳轉(zhuǎn)化體系，并將 DefH9-iaaM5 無核基因和Rol ABC 矮化基因?qū)肷程镨?，對轉(zhuǎn)化植株進行了分子檢測，主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下： 1.研究了外植體的離體再生系統(tǒng)。建立了沙田柚無菌苗繁殖體系，并對外植體不定芽再生能力以及基本培養(yǎng)基、6-BA 濃度、激素組合和活性碳等因素對上胚軸不定芽再生能力的影響進行了比較，篩選出沙田柚上胚軸

3、為離體再生體系最佳外植體，其分化不定芽的適宜培養(yǎng)基為 MS+ 3mg·L<'-1> 6-BA。 2.通過卡拉霉素敏感性試驗，確定了沙田柚上胚軸外植體不定芽誘導(dǎo)的卡拉霉素臨界耐受濃度為 75mg·L<'-1>，同時研究了頭孢霉素(Cef)和羧芐青霉素(Cb)對沙田柚上胚軸不定芽芽誘導(dǎo)和農(nóng)桿菌抑菌效果的影響，發(fā)現(xiàn)兩種脫菌劑濃度超過 500mg·L<'-1>時對上胚軸外植體不定芽的誘導(dǎo)有抑制作用，而且隨著濃度升高抑制程度加大。抑菌試驗

4、表明，Cef對EHA105和C85菌株的抑菌效果比Cb好，適宜的脫菌濃度為 500mg·L<'-1>。 3.通對影響農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化效率幾個主要因素進行的研究發(fā)現(xiàn)，沙田柚上胚軸外植體在侵染前預(yù)培養(yǎng)2d、農(nóng)桿菌侵染時濃度OD<,600>值為0.5、侵染 15min、侵染后共培養(yǎng)2～4d可獲得較好的轉(zhuǎn)化效果，在共培養(yǎng)基中附加 200 μmol·L<'-1>乙酰丁香酮對轉(zhuǎn)化效果無明顯的影響。 4.將通過共培的上胚軸在MS+3mg·L