沙田柚(3x、4x)與紅江橙(4x)多倍體基因組變異及其DNA甲基化分析.pdf

1、多倍化是植物進化的主要推動力，常常伴隨發(fā)生大量遺傳與表觀遺傳變異，使植物出現(xiàn)新的表型，如抗旱、抗病蟲、花期、器官大小等，使植物能夠更好的適應(yīng)生存環(huán)境的需要。DNA甲基化作為一種重要的表觀遺傳修飾形式，普遍存在于高等植物中，并在控制基因表達、維持基因組的穩(wěn)定性等方面發(fā)揮重要作用。本試驗一方面運用擴增片段長度多態(tài)性(Amplifiedfragment length polymorphism，AFLP)分析沙田柚和紅江橙在多倍化過程中基因組結(jié)

2、構(gòu)的變異；另一方面運用甲基化敏感擴增多態(tài)性(Methylation sensitive amplified polymorphism，MSAP)對其DNA甲基化水平和遺傳模式進行統(tǒng)計分析，期望可以從基因組結(jié)構(gòu)和DNA甲基化兩個方面初步探討柑橘多倍體的遺傳與進化模式，對果樹多倍體遺傳特性、雜種優(yōu)勢形成以及倍性育種等方面的研究具有重要意義，其主要結(jié)果如下： 沙田柚天然和人工多倍體基因組AFLP分析結(jié)果表明：18對引物共擴增出912個

3、位點，其中多態(tài)性位點為382個，占41.89％。按與二倍體差異位點數(shù)由多到少排序，依次為X14(266)、X18(252)、X8(249)、X5(243)、X1(242)、X7(241)、X6(240)、X4(239)、X17(213)、X3(213)、X15(207)、X12(198)、X16(195)，變異率在21％～29％之間，表明沙田柚多倍體基因組在多倍化中發(fā)生了大量變異，推測是多倍體表型變異的主要原因之一。人工多倍體基因組變異

4、率較天然的高，起源方式相同的多倍體基因組相似度更高，暗示了多倍體基因組的變異不完全是一個隨機事件。 天然紅江橙多倍體基因組AFLP分析結(jié)果顯示：18對共擴出2107條帶，平均每對引物117條，其中，差異帶180條，占總擴增數(shù)的8.21％，條帶增加的位點有43個，占總差異位點數(shù)的23.89％，條帶缺失的位點有137個，占76.11％?？傮w來看，各四倍體單株與二倍體對照的總差異位點數(shù)大致相當，X19為61個(8.74％)，X20為5

5、7個(8.14％)，X2為62個(8.74％)，較之沙田柚多倍體大為降低，表明不同物種對基因組加倍的耐受力不盡相同。分析差異位點出現(xiàn)位置發(fā)現(xiàn)，同時有條帶增加的位點有8個，而同時缺失的位點達33個，占總差異位點數(shù)的68.3％，表明多倍體基因具有較高的相似度，結(jié)合變異率較低，推測紅江橙四倍體均由珠心胚加倍形成。 沙田柚多倍體基因組DNA甲基化分析結(jié)果顯示，18對引物共擴出9688條帶，其中甲基化位點為2368個，包括全甲基化位點為1

6、369個，半甲基化位點999個，多態(tài)性達24.4％。多倍體總甲基化率在21.6％～30.2％間，平均為23.8％。與二倍體對照總甲基化率26.0％比較，多倍體總體上差異不大。但多倍甲基化模式較二倍體進行了大量調(diào)整，包括單態(tài)性位點(A型)，1413個(36.2％)；去甲基化類型(B型)，954個(24.5％)；過或超甲基化類型(C型)1057個(27.1％)；次甲基化類型(D型)437個(12.3％)。主要發(fā)生了過或超甲基化，被認為是抑制

7、某些基因的表達；其次是去甲基化，被認為是激活某些基因的表達。 對紅江橙多倍體及其二倍體對照基因組DNA進行甲基化分析，18對引物共擴出2245個位點，其中，甲基化位點為644個，包括328個全甲基化位點和316個半甲基化位點。四倍體各單株總甲基化率分別為X19(30.64％)、X20(31.01％)和X2(28.24％)，較二倍體的25.04％有所提高；全甲基化率分別為X19(15.23％)、X20(15.05％)、X2(14.

8、21％)，較二倍體的13.99％略有提高。各四倍體單株甲基化模式均有大量調(diào)整，其中以過或超甲基化類型(C型)為主，占33.29％，其次是去甲基化(B型)，占13.45％，最少的是次甲基化(D型)，占11.98％，多倍體通過調(diào)整DNA甲基化模式進行基因表達的調(diào)控。 綜上所述，沙田柚與紅江橙多倍體基因組結(jié)構(gòu)較二倍體均發(fā)生了大量變異，推測為同源基因重組、外源基因的導(dǎo)入所致。多倍體DNA甲基化模式進行了大量調(diào)整，引起基因的表達與調(diào)控變異