PARP抑制劑延緩高同型半胱氨酸血癥誘導(dǎo)ApoE---小鼠動(dòng)脈粥樣硬化斑塊進(jìn)展.pdf

1、本研究分為三部分：
　　 第一部分、PARP抑制劑降低高同型半胱氨酸血癥誘導(dǎo)ApoE-/-小鼠動(dòng)脈粥樣硬化斑塊面積
　　 目的：高同型半胱氨酸血癥（hyperhomocysteinemia，Hhcy）是動(dòng)脈粥樣硬化的一個(gè)重要而獨(dú)立的危險(xiǎn)因子。最近的研究表明多聚ADP 核糖合成酶[Poly (ADP-ribose)polymerase，PARP]的活化與Hhcy誘導(dǎo)的內(nèi)皮功能障礙有關(guān)，而后者是Hhcy 影響動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程

2、的重要機(jī)制之一。因此，我們檢測(cè)PARP 抑制劑是否能夠降低Hhcy誘導(dǎo)的動(dòng)脈粥樣硬化實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型粥樣斑塊的面積。
　　 方法：健康雄性6 周齡純合子ApoE基因缺陷小鼠（ApoE-/-）隨機(jī)分為普通飲食組或高甲硫氨酸飲食組，每組再分別給予隔天腹腔注射PBS溶解的10mg/kg PARP 抑制劑3-aminobenzamide（3-AB）或生理鹽水，持續(xù)12 周。檢測(cè)血脂及血漿同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）含量，

3、分離心臟及主動(dòng)脈，測(cè)量主動(dòng)脈竇斑塊面積，通過實(shí)時(shí)定量PCR及Western Blot等方法檢測(cè)主動(dòng)脈斑塊局部氧化應(yīng)激相關(guān)NADPH氧化酶亞單位p47phox含量、PARP活性及表達(dá)。
　　 結(jié)果：高甲硫氨酸飲食誘導(dǎo)ApoE-/-小鼠產(chǎn)生Hhcy，促進(jìn)氧化應(yīng)激相關(guān)DNA 損傷及PARP活化，顯著增加粥樣斑塊面積。喂以普通飲食的ApoE-/-小鼠能夠自發(fā)產(chǎn)生高脂血癥，PARP 抑制劑3-AB 雖然對(duì)其抑制效果不明顯，卻能在不影響血漿

4、同型半胱氨酸水平和脂質(zhì)含量的情況下，有效抑制Hhcy誘導(dǎo)的PARP活化，顯著降低ApoE-/-小鼠粥樣斑塊面積達(dá)40％。
　　 結(jié)論：PARP 抑制劑3-AB 顯著降低Hhcy誘導(dǎo)的ApoE-/-小鼠動(dòng)脈粥樣硬化斑塊面積，可作為有效抑制粥樣斑塊進(jìn)程的治療方法之一。
　　 第二部分、PARP 抑制劑抑制動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)NF-κB活化及后續(xù)炎癥因子表達(dá)
　　 目的：檢測(cè)多聚ADP 核糖合成酶[Poly (ADP-r

5、ibose)polymerase，PARP] 抑制劑3-aminobenzamide (3-AB)是否能夠抑制高同型半胱氨酸血癥（hyperhomocysteinemia,Hhcy）誘導(dǎo)的ApoE基因缺陷小鼠（ApoE-/-）動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)核因子-κB（nuclearfactor-κB，NF-κB）核轉(zhuǎn)移及后續(xù)炎癥因子的表達(dá)。
　　 方法：健康雄性6 周齡純合子ApoE基因缺陷小鼠（ApoE-/-）隨機(jī)分為普通飲食組或高甲硫

6、氨酸飲食組，每組再分別給予隔天腹腔注射PBS 溶解的10mg/kg PARP 抑制劑3-aminobenzamide（3-AB）或生理鹽水，持續(xù)12 周。檢測(cè)血脂及血漿同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）含量，分離心臟及主動(dòng)脈，通過Western Blot，免疫組化及實(shí)時(shí)定量PCR等方法檢測(cè)主動(dòng)脈斑塊局部胞漿、胞核內(nèi)及總蛋白中的NF-κB p65、κB抑制蛋白(IκB)及磷酸化IκB(p-IκB)的表達(dá)，檢測(cè)斑塊局部炎癥因子

7、VCAM-1和MCP-1的表達(dá)。
　　 結(jié)果：高甲硫氨酸飲食喂養(yǎng)的ApoE-/-小鼠產(chǎn)生Hhcy，促進(jìn)主動(dòng)脈斑塊細(xì)胞胞核內(nèi)NF-κB p65 及總蛋白中p-IκB的表達(dá)增高，即促進(jìn)NF-κB的核轉(zhuǎn)移，繼而提高斑塊局部VCAM-1和MCP-1的表達(dá)；喂以普通飲食的ApoE-/-小鼠能夠自發(fā)產(chǎn)生高脂血癥，PARP 抑制劑3-AB 雖然對(duì)其抑制效果不明顯，卻能在不影響血漿同型半胱氨酸水平和脂質(zhì)含量的情況下，有效抑制伴有Hhcy小鼠NF

8、-κB 核內(nèi)表達(dá)及p-IκB的含量，增加胞漿內(nèi)NF-κB的表達(dá)，從而顯著降低粥樣斑塊內(nèi)炎癥因子的表達(dá)。
　　 結(jié)論：PARP 抑制劑3-AB 顯著抑制Hhcy誘導(dǎo)的ApoE-/-小鼠動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)NF-κB 核轉(zhuǎn)移及后續(xù)炎癥因子的表達(dá)。
　　 第三部分、PARP 抑制劑促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)細(xì)胞凋亡
　　 目的：檢測(cè)多聚ADP 核糖合成酶[Poly (ADP-ribose)polymerase，PARP] 抑

9、制劑3-aminobenzamide (3-AB)對(duì)高同型半胱氨酸血癥（hyperhomocysteinemia，Hhcy）誘導(dǎo)的ApoE基因缺陷小鼠（ApoE-/-）動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)細(xì)胞凋亡的影響。
　　 方法：健康雄性6 周齡純合子ApoE基因缺陷小鼠（ApoE-/-）隨機(jī)分為普通飲食組或高甲硫氨酸飲食組，每組再分別給予隔天腹腔注射PBS 溶解的10mg/kg PARP 抑制劑3-aminobenzamide（3-AB）或

10、生理鹽水，持續(xù)12 周。檢測(cè)血脂及血漿同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）含量，分離心臟及主動(dòng)脈，檢測(cè)粥樣硬化斑塊內(nèi)細(xì)胞凋亡情況及相關(guān)caspase-3酶蛋白表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：高甲硫氨酸飲食喂養(yǎng)的ApoE-/-小鼠產(chǎn)生Hhcy，促進(jìn)主動(dòng)脈斑塊內(nèi)caspase-3的活化及細(xì)胞凋亡；PARP 抑制劑3-AB 雖然對(duì)普通飲食小鼠影響效果不明顯，卻能在不影響血漿同型半胱氨酸水平和脂質(zhì)含量的情況下，明顯促進(jìn)Hhcy誘導(dǎo)小