VEGF和PEDF的基因多態(tài)性與增殖型糖尿病視網(wǎng)膜病變的關系.pdf

1、目的：糖尿病視網(wǎng)膜病變（Diabetic Retinopathy，DR）是糖尿病的一種嚴重微血管并發(fā)癥，是成年糖尿病患者致盲的一個主要原因。糖尿病視網(wǎng)膜病變以血管通透性增加、組織缺血、新生血管形成為其特征。血管內(nèi)皮生長因子（Vascular Endothelial Growth Factor，VEGF）可以刺激新生血管形成，增加微血管系統(tǒng)的通透性。而色素上皮細胞衍生因子（pigment epithelium-derived factor

2、，PEDF）作為VEGF的拮抗劑，能對抗多種促血管生成因子，有針對性地抑制病理性血管生成，延緩糖尿病視網(wǎng)膜病變的進展，發(fā)揮保護作用。在糖尿病視網(wǎng)膜病變中，VEGF和PEDF之間的不平衡，即VEGF濃度的升高或PEDF濃度的下降，會導致視網(wǎng)膜新生血管形成。目前認為DR的發(fā)病可能受VEGF和PEDF基因的影響，而基因又存在多態(tài)性現(xiàn)象。
　　 本研究旨在探討VEGF和PEDF的基因多態(tài)性與增殖型糖尿病視網(wǎng)膜病變的關系。
　　

3、方法：按WHO1999年推薦的糖尿病診斷標準和1985年第三屆全國眼科學術會議DR診斷標準，隨機選擇2006.9-2008.6在保定市第一醫(yī)院內(nèi)分泌科住院的2型糖尿病患者共160例。按照眼底熒光造影結(jié)果分為增殖型視網(wǎng)膜病變組（Proliferative Diabetic Retinopathy，PDR）68例及非增殖型視網(wǎng)膜病變組（Nonproliferative Diabetic Retinopathy，NPDR）92例，同時隨機選擇

4、基線調(diào)查中的健康個體77例，作為正常對照組。分別取靜脈血5ml，胍鹽酸法提取全血基因組DNA。首先運用聚合酶鏈式反應-限制性酶切片段長度多態(tài)性（Polymerase Chain Reaction Restriction Fragment Length Polymorphism.，PCR-RFLP）技術確定標本VEGF-460 C/T和PEDF Met72Thr（T/C）基因型，接著運用高分辨率熔解曲線法（High Resolution

5、Melt，HRM）分析大量樣本VEGF-460C/T和PEDF Met72Thr（T/C）基因多態(tài)性和增殖型糖尿病視網(wǎng)膜病變的關系。同時檢測糖化血紅蛋白（GlyoohemoglobinAlc，HbAlc）、體重指數(shù)（Body Mass Index，BMI）、收縮壓（Systolic blood pressure，SBP）、舒張壓（Diastolic Blood Pressure，DBP）、血尿素氮（Blood Urea Nitrogen

6、，BUN）、總膽固醇（Total Cholesterol，TC）、甘油三酯（Triglycefide，TG）、血肌酐（serum creatinine）等臨床與生化指標。對所有資料進行正態(tài)性檢驗，Hardy-Weinberg平衡法檢驗各組基因頻率的群體代表性。正態(tài)分布的資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示；非正態(tài)性分布資料以中位數(shù)（四分位數(shù)間距）表示。計量資料的組間比較用t或t’檢驗；計數(shù)資料組間比較用x2檢驗；2型糖尿病PDR發(fā)生的危險因

7、素用Logistic回歸分析。
　　 結(jié)果：（1）臨床資料比較分析：160例糖尿病患者的平均年齡、性別構成比與正常對照組的平均年齡、性別構成比無明顯差異（p>0.05）；NPDR組、PDR組體重指數(shù)、收縮壓、舒張壓、膽固醇、甘油三酯、尿素氮、血肌酐、糖化血紅蛋白均明顯高于正常對照組（p<0.05），而上述各指標在NPDR組與PDR組兩組間無統(tǒng)計學意義（p>0.05）。增殖型視網(wǎng)膜病變組的病程（13.0±6.2）年明顯長于非增殖型

8、視網(wǎng)膜病變組（5.7±5.4）年（p<0.05）。（2）VEGF-460C/T基因型及兩種等位基因分布：VEGF基因在NPDR組、PDR組及正常對照組的均存在C、T兩種等位基因和CC、CT、TT三種基因型，將各實際觀察值代入Hardy-Weinberg平衡公式進行檢驗，結(jié)果顯示：各組x2亡值均小于3.84（df=1，p=0.05；x2=3.84），即p值均大于0.05，說明實際基因頻率與期望基因頻率的差異沒有統(tǒng)計學意義，其分布符合Har

9、dy-Weinberg平衡，具有群體代表性。CC基因型在正常對照組、非增殖型視網(wǎng)膜病變組和增殖型視網(wǎng)膜病變組的頻率分別為12.99％、17.07％和27.94％。CC基因型頻率在增殖型視網(wǎng)膜病變組顯著高于正常對照組和非增殖型視網(wǎng)膜病變組（x2值分別為11.095，6.275，p均<0.05）；CC基因型頻率在非增殖型視網(wǎng)膜病變組和正常對照組無統(tǒng)計學差異（x2=1.118，p>0.05）。C等位基因在正常對照組、非增殖型視網(wǎng)膜病變組和增殖

10、型視網(wǎng)膜病變組的頻率分別為37.01％，43.03％和55.88％。C等位基因頻率在增殖型視網(wǎng)膜病變組顯著高于正常對照組和非增殖型視網(wǎng)膜病變組（x2值分別為7.13，5.70，p均<0.05）；C等位基因頻率在在非增殖型視網(wǎng)膜病變組和正常對照組無統(tǒng)計學差異（x=1.01，p>0.05）。（3）PEDF Met72Thr（T/c）基因型及兩種等位基因的分布：PEDF基因在NPDR組、PDR組及正常對照組的均存在T、C兩種等位基因和TT、T

11、C、CC三種基因型。將各實際觀察值代入Hardy-Weinberg平衡公式進行檢驗，結(jié)果顯示：各組x2值均小于3.84（df=1，p=0.05；x2=3.84），即p值均大于0.05，說明實際基因頻率與期望基因頻率的差異沒有統(tǒng)計學意義，其分布符合Hardy-Weinberg平衡，具有群體代表性。TT基因型在正常對照組、非增殖型視網(wǎng)膜病變組和增殖型視網(wǎng)膜病變組的頻率分別為32.46％、46.74％和48.53％。TT基因型頻率在增殖型視網(wǎng)

12、膜病變組中高于正常對照組（x2=3.882，p<0.05）； TT基因型頻率在增殖型視網(wǎng)膜病變組和非增殖型視網(wǎng)膜病變組比較，無統(tǒng)計學差異（x2=0.50，p>0.05）；TT基因型頻率在非增殖型視網(wǎng)膜病變組與正常對照組，無統(tǒng)計學差異（x2=3.550，p>0.05）。T等位基因在正常對照組、非增殖型視網(wǎng)膜病變組和增殖型視網(wǎng)膜病變組頻率分別為48.05％，57.61％和60.29％。T等位基因頻率在增殖型視網(wǎng)膜病變組高于正常對照組（x2=

13、4.355，p<0.05）；T等位基因頻率在增殖型視網(wǎng)膜病變組和非增殖型視網(wǎng)膜病變組比較，無統(tǒng)計學差異（x2=0.233，p>0.05）；T等位基因頻率在非增殖型視網(wǎng)膜病變組和正常對照組比較，無統(tǒng)計學差異（x2=3.076，p>0.05）。（4）VEGF不同基因型與增殖型視網(wǎng)膜病變發(fā)生率的比較：TT基因型患者患增殖型視網(wǎng)膜病變的率為27.5％，而等位基因C攜帶患者患增殖型視網(wǎng)膜病變的率為47.5％。等位基因C攜帶患者患增殖型視網(wǎng)膜病變的

14、率明顯高于TT基因型患者（x2=4.91， p<0.05）。等位基因C攜帶患者患增殖型視網(wǎng)膜病變的危險性是TT基因型患者患增殖型視網(wǎng)膜病變的2.39倍（OR=2.39，95％CI為1.09-5.21）。（5）PEDF Met72Thr（T/C）不同基因型與增殖型視網(wǎng)膜病變發(fā)生率的比較：CC基因型患者患增殖型視網(wǎng)膜病變的率為3958％，等位基因T攜帶患者患增殖型視網(wǎng)膜病變的率為患43.75％。等位基因T攜帶患者患增殖型視網(wǎng)膜病變的率與CC

15、基因型患者無統(tǒng)計學差別（x2=0.239，p=0.625）。（6）2型DM并發(fā)增殖型視網(wǎng)膜病變危險因素分析：以有無PDR為因變量，VEGF基因型、PEDF基因型、性別、年齡、病程、體重指數(shù)、收縮壓、舒張壓、膽固醇、甘油三酯、尿素氮、肌酐、糖化血紅蛋白為自變量，做多因素非條件Logistic回歸分析，研究多因素對PDR發(fā)病的影響。結(jié)果顯示只有VEGF基因多態(tài)性（OR=2.12，95％CI為1.20-3.73）和病程（OR=1.48，95％

16、CI為1.24-1.78）是2型DM并發(fā)增殖型視網(wǎng)膜病變的危險因素。VEGF基因型和病程做二乘交互作用分析，結(jié)果顯示交互作用后的OR=2.04（P<0.05），處于VEGF基因型和病程二者OR值之間，即1.48<2.04<2.21，所以它們的交互作用不明顯。對VEGF基因型和PEDF基因型做交互作用分析，結(jié)果顯示交互作用后的OR=2.26（P<0.05），大于他們各自的OR值，即1.37<2.21<2.26，表明VEGF基因型和PEDF