白細(xì)胞介素6及其啟動(dòng)子基因多態(tài)性與兒童1型糖尿病相關(guān)性的研究.pdf

1、目的: 1型糖尿病是兒童常見(jiàn)的內(nèi)分泌疾病，它的發(fā)病是遺傳，環(huán)境，免疫因素共同作用的結(jié)果。1型糖尿病是多基因疾病，白細(xì)胞介素6(IL-6)是近年研究認(rèn)為可能與1型糖尿病相關(guān)的細(xì)胞因子。本研究檢測(cè)1型糖尿病病例組及對(duì)照組外周血白細(xì)胞介素6的水平。探討它在1型糖尿病患兒體內(nèi)的變化，同時(shí)應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性法(PCR-RFLP)對(duì)白細(xì)胞介素6基因啟動(dòng)子-572位點(diǎn)進(jìn)行研究，探討此位點(diǎn)基因多態(tài)性是否與1型糖尿病相關(guān)，對(duì)

2、于不同基因型進(jìn)一步探討其是否與外周血IL-6的水平，發(fā)病年齡及發(fā)病時(shí)空腹C肽水平相關(guān)。 方法: 1.應(yīng)用放射免疫分析法檢測(cè)1型糖尿病患兒組及對(duì)照組外周血IL-6水平。 2.應(yīng)用鹽析法提取病例組與對(duì)照組外周血的DNA，并在1％瓊脂糖凝膠電泳上觀察提取結(jié)果。 3.應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)對(duì)病例組及對(duì)照組包含IL-6基因啟動(dòng)子-572位點(diǎn)的特異片段進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增的目的片段用2.5％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。 4.將

3、擴(kuò)增產(chǎn)物用MbiI內(nèi)切酶進(jìn)行酶切，酶切產(chǎn)物在3％瓊脂糖凝膠電泳上檢測(cè)，并對(duì)其進(jìn)行定性分析。 5.應(yīng)用放射免疫分析法檢測(cè)病例組外周血的空腹C肽水平。 6.根據(jù)Hardy-Weinburg遺傳平衡定律檢查病例組及對(duì)照組所得基因型是否具有群體代表性。 7.應(yīng)用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，其中病例組與對(duì)照組外周血IL-6水平的比較及病例組中首診病人與復(fù)診病人外周血IL-6水平的比較均采用兩組獨(dú)立樣本的t檢

4、驗(yàn)。病例組與對(duì)照組的IL-6基因啟動(dòng)子-572位點(diǎn)基因型頻率的比較采用Fisher精確概率法，等位基因頻率的比較采用x2檢驗(yàn)，用相對(duì)比值比及95％可信區(qū)間表示相對(duì)危險(xiǎn)度。不同國(guó)家IL-6基因啟動(dòng)子-572位點(diǎn)基因型頻率的比較采用x2檢驗(yàn)或Fisher精確概率法。病例組不同基因型間IL-6水平，發(fā)病年齡及發(fā)病時(shí)空腹C肽水平的比較均采用兩組獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)。 結(jié)果: 1.病例組與對(duì)照組兒童性別及年齡的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0

5、.05)，具有可比性。 2.病例組與對(duì)照組兒童外周血IL-6水平的比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，病例組中首診病人與復(fù)診病人外周血IL-6水平的比較差異仍無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(P>0.05)。 3.IL-6基因啟動(dòng)子-572位點(diǎn)經(jīng)PCR擴(kuò)增后產(chǎn)物片段為163bp，酶切后分為3種基因型，CC型為1條帶(163bp)，GC型為3條帶(163bp，101bp，62bp)，GG型為2條帶(101bp，62bp)。 4.病例組與對(duì)照組基因

6、型頻率符合Hardy-Weinburg遺傳平衡定律，具有群體代表性。 5.對(duì)照組IL-6基因啟動(dòng)子-572位點(diǎn)基因型及等位基因頻率的分布與中國(guó)其他研究結(jié)果比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，與日本比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，與法國(guó)、美國(guó)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 6.病例組與對(duì)照組IL-6基因啟動(dòng)子-572位點(diǎn)基因型頻率及等位基因頻率分布的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，等位基因頻率的相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)

7、分析示G等位基因的攜帶者患1型糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)是C等位基因攜帶者的1.939倍(OR=1.939，95％CI=1.023～3.678)。 7.病例組IL-6基因啟動(dòng)子-572位點(diǎn)不同基因型間IL-6水平的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(P>0.05)。7.病例組IL-6基因啟動(dòng)子-572位點(diǎn)不同基因型間發(fā)病年齡的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其中攜帶G等位基因的患兒發(fā)病年齡早于CC基因型的患兒。 8.病例組IL-6基因啟動(dòng)子-572

8、位點(diǎn)不同基因型間空腹C肽水平的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(P>0.05) 結(jié)論:1.1型糖尿病患兒體內(nèi)IL-6水平無(wú)變化，IL-6基因啟動(dòng)子-572位點(diǎn)不同基因型患兒體內(nèi)的IL-6水平亦無(wú)變化。 2.不同種族IL-6基因啟動(dòng)子-572位點(diǎn)基因多態(tài)性存在差異，亞洲人群可能具有相似的基因型及等位基因分布，歐美國(guó)家可能具有相似的基因型及等位基因分布。 3.IL=6基因啟動(dòng)子-572位點(diǎn)基因多態(tài)性可能與1型糖尿病的發(fā)病存在相關(guān)性