煙夜蛾性肽受體的分子鑒定和棉鈴蟲交配對抗菌肽表達(dá)量的影響.pdf

1、精液蛋白和抗菌肽(antimicrobial peptides，AMPs)是參與昆蟲生殖和免疫的重要生命物質(zhì)。已有的研究顯示，昆蟲通過交配可以將雄蟲精液蛋白轉(zhuǎn)移至雌蟲，從而影響雌蟲的生殖行為和免疫反應(yīng)。顯然，探明精液蛋白作用的分子機(jī)理，對于全面了解交配對雌蟲生殖行為轉(zhuǎn)變和免疫能力變化的調(diào)控規(guī)律，發(fā)展影響害蟲生殖過程和免疫能力的分子干擾技術(shù)等具有重要的理論及實(shí)踐意義。為此，本研究選取鈴夜蛾屬Helicoverpa近緣種昆蟲煙夜蛾H.ass

2、ulta（Guenée）和棉鈴蟲H.armigera(Hübner)為試驗(yàn)材料，分別進(jìn)行了煙夜蛾性肽受體(sex peptide receptor，SPR)基因的克隆與表達(dá)和7種昆蟲抗菌肽基因在不同交配狀態(tài)棉鈴蟲雌蟲腹部的表達(dá)情況研究，探討了交配對性肽受體基因和抗菌肽基因表達(dá)水平的影響規(guī)律。主要研究結(jié)果如下:
　　(1)利用RT-PCR方法，獲得了長2048 bp的煙夜蛾性肽受體基因cDNA序列，該基因開放式閱讀框?yàn)?275bp，

3、推導(dǎo)編碼424個(gè)氨基酸殘基，預(yù)測分子量為48.6kD，等電點(diǎn)為9.25。氨基酸序列分析預(yù)測該受體含有7個(gè)跨膜區(qū)，具有G蛋白偶聯(lián)受體典型的結(jié)構(gòu)特征，且獲得cDNA所編碼的氨基酸與其它蛾類同源物氨基酸序列的一致性均超過80％。此基因暫被命名為HassSPR，已在GenBank中登錄，登錄號為AFH53182.1。
　　(2)利用熒光定量PCR方法，測定了HassSPR基因在煙夜蛾雌蟲不同組織、不同發(fā)育期的轉(zhuǎn)錄水平，結(jié)果表明，HassS

4、PR基因在1日齡雌蛾信息素腺體、交配囊、卵巢、腦、胸神經(jīng)節(jié)和肌肉中都有表達(dá)，其中在腦中表達(dá)量最高;該基因在羽化前1天雌蟲信息素腺體中即有表達(dá)，但表達(dá)量較低，表達(dá)量于3日齡達(dá)到最高峰，之后又逐漸降低。
　　(3)利用熒光定量PCR方法，研究了交配對煙夜蛾雌蟲不同組織（信息素腺體、交配囊、腦和卵巢）中HassSPR基因表達(dá)水平的影響。結(jié)果顯示，交配以后，雌蛾腦和信息素腺體中的HassSPR基因表達(dá)量極顯著上調(diào)，而交配囊和卵巢中Hass

5、SPR基因表達(dá)量極顯著下調(diào)。
　　(4)利用熒光定量PCR方法，研究了棉鈴蟲交配對7種抗菌肽基因表達(dá)水平的影響。結(jié)果表明，供試的7種抗菌肽基因?qū)慌涞恼T導(dǎo)反應(yīng)不盡相同，其中交配抑制天蠶素3（Cecropin3）基因的轉(zhuǎn)錄，誘導(dǎo)天蠶素D（CecropinD）、Moricin、防衛(wèi)素（Defensin）、蠶幼抗菌肽（Lebocin）、攻擊素(Attacin)和葛佬素（Gloverin）基因轉(zhuǎn)錄，而交配對于抗菌肽基因表達(dá)水平的影響僅局限